細胞周期制御活性化因子サイクリンの前立腺癌ホルモン療法抵抗性獲得に及ぼす影響

细胞周期控制激活剂细胞周期蛋白对前列腺癌激素治疗耐药性的影响

• 批准号: 14770818
• 负责人: 永田 大介
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770818/
• 关键词: 前立腺癌; 細胞周期; P27; SKP2; Jab1; プロスタグランデインJ2; p27; JAB1

前立腺癌臨床検体を細胞周期制御因子で免疫染色を施行した。細胞周期のG1からS期に関連しているサイクリンE、p27、JAB1、SKP2の組織内発現を検討した。P27は細胞周期のアクセルを止めるブレーキの役割を果たしておりp27の減衰が細胞周期をG1からS期に回転させている、またJAB1、SKP2はそのp27をdegradationするタンパクであり、現在注目されている物質である。結果はp27とgradeには負の相関が、SKP2とgradeには正の相関があるようであった。前立腺癌細胞株を用いて細胞周期関連因子の変動を前立腺癌細胞株(PC3、LNCap、DU145)を用い、細胞周期をG1期に停止させ、アポトーシスを誘導するといわれるプロスタグランデインJ2にて刺激し、細胞周期制御因子の変動を観察した。まず、前立腺癌細胞株を培養し、プロスタグランデインJ2の濃度勾配を作成しそれぞれ刺激し、経時的に細胞数を計測、濃度5μg/mlで細胞数増加を抑制でき、10μg/mlでは早期にアポトーシスの誘導ができた。次にプロスタグランデインJ2濃度5μg/mlにて刺激し経時的に細胞を回収し、細胞周期の解析をおこなった。細胞周期解析はFACSフローサイトメーターを使用した。結果はアポトーシスの誘導、G1アレストなどの傾向が認められた。前立腺癌細胞株(PC3、LNCap、DU145)をプロスタグランデインJ2にて濃度5μg/mlにて刺激し経時的に細胞を回収、それよりタンパクを取り出しp27、jab1、skp2についてWestern blot analysisにて発現およびその量的変化を検討した。P27は刺激後6時間後に発現し始め24時間後にピークがあり48時間後には減少傾向になることが観察された。プロスタグランデインJ2によりp27は高発現することは全ての細胞株にて認められ、p27の発現が減弱するにしたがいjab1、skp2の発現が減少することが認められた。要するに、プロスタグランデインJ2はp27をプロモートし細胞周期を停止させる。蓄積されたp27はjab1、skp2にて分解され、jab1、skp2が消費されることが事実の様である。今後はp27のmRNAの発現をRT-PCRもしくはRibonucleoside protection assay法にて定量、時間的変化をとらえたいと思う。

Immunostaining for cell cycle control factors in advanced adenocarcinoma The relationship between G1 and S phases of the cell cycle and the expression of E, p27, JAB1 and SKP2 in tissues was investigated. P27 cell cycle degradation, cell cycle degradation P27: negative correlation, SKP2: positive correlation Changes in cell cycle-related factors in advanced adenocarcinoma cell lines (PC3, LNCap, DU145) were detected in advanced adenocarcinoma cell lines (PC3, LNCap, DU145) during treatment, cell cycle arrest in G1 phase, cell cycle induction, cell cycle stimulation, and changes in cell cycle regulatory factors. The concentration of J2 was determined at the time of stimulation. The increase of cell number was inhibited at the concentration of 5μg/ml and induced at the concentration of 10μg/ml. The cell cycle analysis was performed at a concentration of 5μg/ml of J2. Cell cycle analysis FACS The results showed that the induction of G1 and G1 was not significant. In the presence of 5μg/ml of J2, the cells were recovered and extracted by Western blot analysis. p27, jab1 and skp2 were detected by Western blot analysis. P27 appears 6 hours after stimulation, 24 hours after stimulation, 48 hours after stimulation, and decreases. It is believed that p27 is highly expressed in all cell lines, but the expression of p27 is weakened, and the expression of jab1 and skp2 is reduced. The cell cycle stops at p27. The accumulation of p27 and jab1, skp2 is the result of decomposition, jab1 and skp2. In the future, the expression of p27 mRNA will be determined by RT-PCR and the riboside protection assay.