歯原性上皮マーカーの単離を目指したマラッセ上皮特異的遺伝子のクローニング

克隆马拉塞上皮特异性基因以分离牙源上皮标记

• 批准号: 14771008
• 负责人: 西村 学子
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Health Sciences University of Hokkaido
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771008/
• 关键词: 歯根膜; マラッセ上皮細胞; ケラチノサイト; 歯原性上皮

マラッセ上皮遺残は、歯根膜の中という生理的に内部環境に存在する特殊な上皮であり、もともと内外エナメル上皮が発生過程の根相当部で断裂し、ベルトヴイッヒ上皮鞘が歯根膜に残存したものである。これまでに、このマラッセ上皮をブタ歯根膜から単離し、この細胞を用いた研究を行ってきている。口腔上皮と同じ扁平上皮細胞ということから歯肉上皮のモデル系として用いているとの報告もあるが、われわれの行ってきた実験では、Ca^<2+>濃度非依存的細胞増殖を示すなど口腔上皮との違いも明らかになってきている。本研究では、口腔上皮細胞との比較からマラッセ上皮細胞が特異的に発現、あるいは強度に発現しているものを単離し、それらのセメント質形成の誘導、歯根膜再生に関する因子の検索を目的とした。そこで、ブタ歯根膜から単離したマラッセ上皮細胞と口腔上皮細胞からそれぞれRNAを抽出、cDNAを作製後、Differential Display(DD)法を行った。DD法により特異的な遺伝子は、マラッセ上皮のみで発現しているものが16種、マラッセ上皮に強発現していると考えられるものが32種確認された。これらの確認された遺伝子をアクリルアミドゲルごと切り出し、クローニング用ベクターに組み込み単離し、塩基配列を確認した。Blast検索により、マラッセ上皮に特異性の高い遺伝子としてsmall heat shock proteinが候補にあがり、この遺伝子の情報から新たにPCR primerを作製しRT-PCRを再度行った。その結果、口腔上皮との発現の差がみられ、マラッセ上皮特異的遺伝子の一つと考えられた。また、その他切り出されたバンドについては再現性に乏しく、結果として、マラッセ上皮細胞に強く発現が確認された特異遺伝子は2つのみであった。今後は、さらにエナメル関連タンパクをはじめとしたセメント質形成誘導因子を検索していきたい。

Residual epithelial cells are the special epithelial cells that exist in the physiological internal environment of the dental root membrane, the internal and external epithelial cells are broken in the root area during the growth process, and the epithelial sheath remains in the dental root membrane. This is the first time that we've had a chance to study this topic. Oral squamous epithelial cells are the same as oral squamous epithelial cells. The oral squamous epithelial cells are the same as oral squamous epithelial cells. The oral squamous epithelial cells are the same as oral squamous cells. This study aims to compare the expression, intensity, and role of factors in the induction, regeneration, and regeneration of root membranes in oral epithelial cells. RNA extraction, cDNA production, and Differential Display(DD) were performed in the oral epithelium. 16 species were identified by DD method, and 32 species were identified by DD method. This is the first time that we've had a chance to get together. We've had a chance to get together. Blast detection, high specificity, small heat shock protein, candidate detection, new PCR primer The results, oral epithelium and development of differences, and the development of epithelial-specific genes. In addition, the results showed that there was a lack of reproducibility in the epithelial cells and that there was a strong presence of specific genes in the epithelial cells. In the future, the relationship between the two factors will be discussed.

项目成果

Abiko Y, Jinbu Y, Noguchi T, Nishimura M, et al.: "Upregulation of human beta-defensin 2 peptide expression in oral lichen planus, leukoplakia and candidiasis. An Immunohistochemical study"Pathol. Res. Pract.. 198. 537-542 (2002)

Abiko Y、Jinbu Y、Noguchi T、Nishimura M 等：“口腔扁平苔藓、白斑和念珠菌病中人 β-防御素 2 肽表达的上调。免疫组织化学研究”Pathol。

Abiko Y, Nishimura M, et al.: "Expression of MIP-3α/CCL20, a macrophage inflammatory protein in oral squamous cell carcinoma"Archiv Oral Biol. (In press). (2003)

Abiko Y、Nishimura M 等人：“口腔鳞状细胞癌中巨噬细胞炎症蛋白 MIP-3α/CCL20 的表达”Archiv Oral Biol（2003 年出版）。

Abiko Y, Nishimura M, et al.: "Upregulated expression of human (β defensin-1 and -3 mRNA differentiation of keratinocyte immortalized cell lines, HaCaT and PHK16-0b"J Dermatol Sci. 31. 225-228 (2003)

Abiko Y、Nishimura M 等人：“角化细胞永生化细胞系、HaCaT 和 PHK16-0b 的人（β 防御素-1 和 -3 mRNA 分化）的上调表达”J Dermatol Sci. 31. 225-228 (2003)

Abiko Y, Nishimura M, et al.: "Expression of MIP-3α/CCL20,a macrophage inflammatory protein in oral squamous cell carcinoma"Archiv Oral Biol. 48. 171-175 (2003)

Abiko Y、Nishimura M 等：“口腔鳞状细胞癌中巨噬细胞炎症蛋白 MIP-3α/CCL20 的表达”Archiv Oral Biol. 48. 171-175 (2003)

Nishimura M, et al.: "Localization of human β-defensin 3 mRNA in normal oral epithelium, leukoplakia, and lichen planus : an in situ hybridization study"Med Electron Microsc. 36(1). 94-97 (2003)

Nishimura M 等人：“正常口腔上皮、白斑和扁平苔藓中人 β-防御素 3 mRNA 的定位：原位杂交研究”Med Electron Microsc 36(1)。