偏性嫌気性菌における薬剤排出機構の解明

专性厌氧菌药物排泄机制的阐明

• 批准号: 14771016
• 负责人: 宮前 真
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Aichi Gakuin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771016/
• 关键词: Bacteroides fragilis; Bacteroides thetaiotaomicron; 薬剤排出ポンプ; ノルフロキサシン

我々は,現在までに,宿主大腸菌の複数の薬剤に対する抵抗性を高めるBacteroides thetaiot aomicron ゲノムDNA断片のクローン化に成功し,その遺伝子.(bexAと名付けた)を同定した.そして,種々の検討から,bexA遺伝子は明らかに薬剤排出ポンプに関わる遺伝子であり,さらに薬剤排出ポンプの中では新しいMATEファミリーに属することを証明した.しかし,Bacteroides fragilis groupの中で,特に嫌気性菌感染症に関与するとされている,B.fragilis からは,B.thetaiotaomicronと同様のDNA断片のクローン化には成功していなかった.そこで,現在B.fragilisのgenome解析を遂行しているSanger InstituteのwebサイトからB.fragilis塩基配列に対して,bexAの塩基配列をテンプレートとしたBLASTサーチを行なうと,高確立で相同性を示すDNA領域がヒットした.そこで,その遺伝子領域の5'と3'にプライマーを設計し,B.fragilis ATCC25285染色体DNAをテンプレートとしてPCRにて増幅した(1,090bp).その増幅されたDNA断片をスーサイドベクターpGERMに組み込み,大腸菌DH5αに導入した.得られたリコンビナントを制限酵素地図を作成して確認し,再度大腸菌S17-1に導入した.そのS17-1とB.fragilis ATCC25285株をMaitingし,B.fragilisの同遺伝子領域ノックアウト株作成を試みた.ゲンタマイシン,エリスロマイシンが添加されたGAMプレート上に出現した7コロニーを得た.その7コロニーとコントロールとしての親株の薬剤感受性をノルフロキサシンについて調べると,親株に対してその7コロニーは全て感受性が増していた.これにより,B.fragilisの薬剤排出ポンプをコードする遺伝子領城,すなわちbexAと相同性を有する領域がノックアウトされた事が考えられる.今後は,このリコンビナントプラスミドとそのDNA断片やノックアウト株について益々検討を加えていく予定である.

In response, the host coliform has high resistance to multiple agents. Bacteroides thetaiot aomicron is successfully transformed into DNA fragments. (bexA The name of the person who paid the price was fixed. In addition to the above, the BexA gene has been proved to be a new gene in the MATE gene. In the group of Bacteroides fragilis, B.fragilis and B.thetaiotaomicron were successfully transformed into DNA fragments of the same species. Therefore, now that the general analysis of B.fragilis is being implemented on the Sanger Institute's web server and the base assignment of B.fragilis is being implemented, the base assignment of bexA is being implemented on the BLAST server, showing the high level of similarity in the DNA field. 5'and 3' chromosome DNA of B.fragilis ATCC25285 DNA amplified by PCR (1,090 bp). DNA fragments were introduced into E. coli DH5 α. The restriction enzyme site was identified and E. coli S17-1 was introduced again. S17-1 and B.fragilis ATCC25285 strain were tested in the field of B.fragilis. The first time I saw him was when I was a kid. The sensitivity of the parent plant to the 7-channel amino acid sequence is increased. A. Fraguilis is a domain of identity. B. Fraguilis is a domain of identity. In the future, the DNA fragment of the virus will be further investigated.

项目成果

池田 健, 宮前 真, 上田 青海, 吉村 文信: "嫌気性菌の多剤排出ポンプ"日本細菌学雑誌. 57(4). 607-617 (2002)

Ken Ikeda、Makoto Miyamae、Aomi Ueda、Fuminobu Yoshimura：“厌氧细菌的多药物流出泵”日本细菌学杂志 57(4) 607-617 (2002)。