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歯周靭帯に由来する上皮間葉系細胞相互作用に及ぼすメカニカルストレスの影響

机械应力对牙周膜上皮间质细胞相互作用的影响

基本信息

批准号：
14771220
负责人：
水野智仁
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトマラッセ上皮細胞およびヒト歯周靱帯線維芽細胞はインフォームドコンセントの下、矯正学的理由により抜歯したヒト小臼歯の歯根中央3分の1から酵素処理によって分離、培養したものを用いた。第一にヒト歯肉上皮細胞を単独培養、ヒト歯肉線維芽細胞を単独培養、ヒト歯肉上皮細胞とヒト歯肉線維芽細胞を共培養し、エナメルタンパク質および骨関連タンパク質の遺伝子発現レベルをRT-PCR法を用いて調べた。osteopontin、osteocalcin、bone sialoprotein、bone morphogenetic protein(BMP)-2、BMP-4、amelogenin、tuftelinのmRNA発現はヒト歯肉上皮細胞とヒト歯肉線維芽細胞の共培養によって増加しなかった。ヒトマラッセ上皮細胞の分離と静地培養には成功したが、機械的伸展を加えた培養条件下では研究で用いることのできるレベルまで十分に培養できなかった。そこで、まずヒト歯周靱帯線維芽細胞において、2次元電気泳動によって得られるタンパク質発現像をデータベース化することを試みた。静地条件でヒト歯周靱帯線維芽細胞を培養し、総タンパク質を抽出し、二次元電気泳動を行った。得られた二次元電気泳動パターンをコンピューター上で画像処理し、各タンパク質スポットに1から2500まで番号を付与した。100のタンパク質スポットを選び、ゲルからタンパク質を抽出し、質量分析装置装置を用いてタンパク質を同定した。(タンパク質の同定は続行中であり、ヒト歯周靱帯線維芽細胞の2次元電気泳動によって得られるタンパク質スポットのデータベース化作業を行っている)

The epithelial cells and the peripheral vascular cells were isolated and cultured for orthodontic reasons. The first step is to culture human dental epithelial cells separately, to culture human dental vascular cells separately, to co-culture human dental epithelial cells and human dental vascular cells, and to modulate the development of bone-related DNA by RT-PCR. The mRNA expression of osteopontin, osteocalcin, bone sialoprotein, bone morphogenetic protein(BMP)-2, BMP-4, amelogenin and tuftelin increased in co-culture of dental epithelial cells and dental vascular buds. The isolation and culture of epithelial cells were successful, and the mechanical extension was studied under the culture conditions. In addition, the two dimensional electrokinetic parameters of the first and second dimensional electron transport systems were determined. Under static conditions, the cells were cultured in the medium and the cells were extracted from the medium and the cells were cultured in the medium. The two-dimensional electromigration was carried out on the basis of the image processing, and the quality of each image was determined by the number of pixels. 100. Quality control. Quality control. Quality control. (2-D electromigration of linear cells in the middle of the process)