血液網膜関門特異的遺伝子の探索と機能解明

寻找血视网膜屏障特异性基因并阐明其功能

• 批准号: 14771334
• 负责人: 登美 斉俊
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771334/
• 关键词: 条件的不死化細胞株; TR-iBRB細胞; TR-BBB細胞; 内側血液網膜関門; 血液脳関門

前年度において、温度感受性SV40T抗原遺伝子導入トランスジェニックラットから樹立した条件的不死化網膜および脳毛細血管内皮細胞株(TR-iBRB細胞およびTR-BBB細胞)をin vitroモデルとして用い、両細胞株の発現遺伝子をdifferential display法を用いて解析した。その結果、TR-BBB細胞と比較してTR-iBRB細胞に高発現する遺伝子を8遺伝子検出することができた。今年度は、TR-iBRB細胞高発現遺伝子の特性を詳細に解析することを目的とした。TR-iBRB細胞高発現遺伝子のうち、TR-BBB細胞との発現量の差が最も大きい遺伝子はマウスM-cadherinの3'末端非翻訳領域と高い相同性を示した。マウスおよびヒトM-cadherinの配列をもとにプライマーを設計し,ラットM-cadherinをクローニングした。ラットM-cadherinのアミノ酸配列はマウス,ヒトとそれぞれ97%および86%の相同性を示し、細胞外繰り返し構造および細胞外領域におけるCa^<2+>結合モチーフなどcadherinに特徴的な配列を有していることが推定された。リアルタイム定量PCRを用いた解析の結果、ラットM-cadherinのmRNA発現量比は,TR-iBRB細胞においてTR-BBB細胞の93倍であった。さらに、Western blot法を用いた解析の結果、タンパク質レベルでもM-cadherinがTR-iBRB細胞に高発現していることが示された。以上の結果から、内側血液網膜関門にはM-cadherinが高発現し、細胞接着において内側血液網膜関門は血液脳関門とは一部異なる機構を有している可能性が示された。

In the previous year, the immortalized network endothelial cell line (TR-iBRB cell line TR-BBB cell line) and the in vitro cell line were detected by differential display method. The results showed that the TR-BBB cell number was higher than that of the TR-iBRB cell. This year, the TR-iBRB cell height is very high. This year, the characteristics of the cell height, the cell height, the cell height The difference between TR-iBRB cell height and TR-BBB cell height is much higher than that of TR-BBB cell height. The difference between the two is the highest. The end of the M-cadherin cell is the highest level of homogeneity. The M-cadherin is equipped with the device device, the M-cadherin device, the device, the device, and the device. In this case, the configuration of M-cadherin is sensitive, while that of 97%, 86%, extracellular domain, extracellular domain, Ca ^ & lt;2+>, and the combination of the extracellular domain, Ca ^ and lt;2+>, is shown to be the same as 97%, 86% and 86%. The quantitative PCR was analyzed by using the results of quantitative analysis, the ratio of M-cadherin to mRNA, and the ratio of TR-iBRB to TR-BBB by 93 times. The results were analyzed using the Western blot method, and the results were analyzed using the Western blot method. The results showed that the cell height of the M-cadherin cell was higher than that of the control group. As a result of the above results, the internal blood network door registered the M-cadherin high frequency, and the cell then asked the internal blood network door to register the blood supply system of a medical organization to show that it is possible to do so.

项目成果

登美斉俊: "網膜を標的としたドラッグデリバリー"薬剤学. 63. 193-196 (2003)

Masatoshi Tomi：“针对视网膜的药物递送”药理学 63. 193-196 (2003)。

K.Hosoya: "Enhancement of L-cystine transport activity and its relation to xCT gene induction at the blood-brain barrier by diethyl maleate treatment"J. Pharmacol. Exp. Ther.. 302. 225-231 (2002)

K.Hosoya：“通过马来酸二乙酯处理增强 L-胱氨酸转运活性及其与血脑屏障 xCT 基因诱导的关系”J。

Y.Kang: "Regulation of taurine transport at the blood-brain barrier by TNF-α, taurine and hypertonicity"J. Neurochem.. 83. 1188-1195 (2002)

Y.Kang：“TNF-α、牛磺酸和高渗性对血脑屏障牛磺酸转运的调节”J. Neurochem.. 83. 1188-1195 (2002)

M.Tomi: "Induction of the XCT gene expression and L-cystine transport activity by diethyl maleate at the inner blood-retinal barrier"Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.. 43. 774-779 (2002)

M.Tomi：“马来酸二乙酯在血-视网膜屏障内诱导 XCT 基因表达和 L-胱氨酸转运活性”Invest.Ophasemol.Vis.Sci.. 43. 774-779 (2002)

T.Kondo: "Establishment of conditionally immortalized rat retinal pericyte cell lines (TR-rPCT) and their application in a co-culture system using retinal capillary endothelial cell line (TR-iBRB2)"Cell Struc.Func.. 28. 145-153 (2003)

T.Kondo：“条件永生化大鼠视网膜周细胞系 (TR-rPCT) 的建立及其在使用视网膜毛细血管内皮细胞系 (TR-iBRB2) 的共培养系统中的应用”Cell Struc.Func.. 28. 145-