細胞内酸化物ストレス応答システムの構造生物学的研究

细胞内氧化应激反应系统的结构生物学研究

• 批准号: 14780473
• 负责人: 喜田 昭子
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780473/
• 关键词: SoxRタンパク質; 酸化物ストレス応答; 転写因子; X線結晶構造解析; 結晶化; 鉄硫黄クラスター; DNA結合タンパク質; DNA結合蛋白質

酸化物やラジカルは,ある種のタンパク質から鉄原子を放出させ,細胞にダメージを与えることが知られている.これらの酸化物ストレスに応答し,防御修復系タンパク質が誘導活性化される現象が生体内に存在することが明らかになり,注目を集めている.大腸菌においては,SoxRSレギュロンが酸化ストレスの防御修復機能の役割を担っており,その中てSoxRタンパク質は酸化ストレスに対するセンサーとして防御修復遺伝子の発現を調節している.SoxRタンパク質は,N末端側のDNA結合ドメインとC末端側の鉄イオウクラスターを含む転写制御ドメインからなる単量体が二量体として機能し,鉄イオウクラスターの酸化還元により転写制御を行うと考えられている.本研究は,SoxRタンパク質およびSoxR-DNA複合体の立体構造をX線結晶構造解析の手法を用いて決定し,SoxRタンパク質によるSoxSプロモータの活性化機構を原子レベルで明らかにすることを目的としている.今年度はSoxR全長タンパク質と,その活性部位である2Fe-2Sクラスターを含むC末端ドメインタンパク質について結晶化条件の検索を行ってきた.その結果,培養・精製条件の検討を行ったSoxR全長タンパク質について,タンパク質濃度10mg/mlのとき,PEGを主たる沈殿剤とする条件で結晶を得ることが出来た.この結晶を用いて実験室系X線発生装置で回折実験を行ったところ,3.8Å分解能の反射を確認できた.結晶は六方晶系に属し,その格子定数はa=b=80Å,c=90Åであることが分かった.

Acidification of the substance is the release of iron atoms from the substance, and the release of iron atoms from the cell is known. This phenomenon exists in organisms due to the induction and activation of defense and repair systems. SoxR protein regulates the expression of defense and repair genes in E. coli. SoxR protein regulates the expression of defense and repair genes in E. coli. SoxR protein regulates the expression of defense and repair genes in E. coli.SoxR protein regulates the expression of defense and repair genes in E. coli. Iron and steel production and acidification of the elements, such as iron and steel production and acidification of iron and steel. In this study, the method of X-ray crystallographic analysis of SoxR-DNA complex was used to determine the three-dimensional structure of SoxR-DNA complex. This year, the total length of SoxR is different from the quality of SoxR, and the active site is different from that of SoxR. The active site is different from that of SoxR. As a result, the culture and purification conditions were discussed. The total length of SoxR was determined by the mass concentration of 10mg/ml. PEG was determined by the precipitation conditions. The crystal is used in the X-ray generator, and the reflection of the 3.8-D decomposition energy is confirmed. Crystallization belongs to the hexagonal system, and the lattice number is a=b=80,c=90.