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神経伝達物質の領野レベルの濃度分布を可視化するための酵素膜イメージング法の開発

开发酶膜成像方法以可视化神经递质的区域水平浓度分布

基本信息

批准号：
14740408
负责人：
平野愛弓
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

1.神経伝達物質L-グルタミン酸の脳内分布を知るための方法論を開発することは重要である.以前報告した,グルタミン酸オキシダーゼ(GluOx)-ペルオキシダーゼ(HRP)酵素膜に基づくL-グルタミン酸イメージング法(Anal.Sci.2000,16,25-29)では,L-グルタミン酸の酵素による認識から色素の呈色に至るまでの反応が非可逆的に進行するため,観測される呈色強度は積算放出量に相当し,放出の増減にかかわらず常に増加していた.本研究では,測定時点の発色強度から前時点の発色強度を差し引いた差イメージを各測定時間について算出することにより,単位時間・単位面積当たりのフラックスとしてL-グルタミン酸放出を時間依存的にイメージングすることを検討した.これを,虚血刺激下における海馬スライス内のL-グルタミン酸放出のイメージングに適用し,虚血海馬内で放出されるL-グルタミン酸の領野間分布を時間依存的にイメージングすることに成功した(投稿準備中).2.上述の酵素膜イメージング法を,神経伝達物質の領野間分布の可視イメージング法として一般化するために,エステラーゼ型酵素をもつアセチルコリンを対象に酵素膜を設計した.脳スライス内には大量のアセチルコリンエステラーゼが存在することを利用し,コリンオキシダーゼとHRPに基づく酵素膜を作成した.この酵素膜について,in vitroのモデル実験系を用いて感度,選択性,応答時間等の観点から評価を行った.現在,マウス脳スライスを用いて刺激によって放出されるアセチルコリンの領野間分布の時間依存的イメージングについて検討中である.

1. A methodology for understanding the distribution of L-glucuronic acid in the brain is developed. Previously reported, GluOx-Glu (Anal. Sci. 2000, 16, 25 -29) However, the enzyme activity of L-glucuronic acid increases from the recognition of pigment coloration to the irreversible development of the reaction. In this study, the color intensity difference between the measurement time and the previous time was calculated for each measurement time, and the unit time and unit area were calculated for each measurement time. 2. The method of enzyme membrane synthesis, the method of visual analysis and generalization of the distribution of L-glucuronic acid in hippocampus under hypoglycemic stimulation. The enzyme membrane was designed for this purpose. A large number of people are involved in the production of HRP. The enzyme membrane is in the middle of the reaction,in vitro and in the middle of the reaction system, sensitivity, selectivity, response time, etc. Now, the time dependence of the distribution between domains in the field of time is determined by the stimulus.