過剰発現型変異体によるアラビドプシスF-BOXタンパク質群のバルク機能解析

使用过表达突变体对拟南芥 F-BOX 蛋白进行批量功能分析

• 批准号: 14740448
• 负责人: 黒田 浩文
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14740448/
• 关键词: F-boxタンパク質; ユビキチン; シロイヌナズナ; タンパク質分解; ゲノム; SCF複合体; 遺伝子ファミリー; 形質転換植物体

本年度は前年に引き続き過剰発現型変異体ラインから得られた変異体の解析を行なった。F-boxタンパク質遺伝子のcDNAをアンチセンスの向きで過剰発現させたラインから、フローサイトメーターを用いてPliodyの上昇している変異体をスクリーニングした。この変異体は暗所において32Cのピークが、明所において16Cのピークが顕著に増加していた。また、暗所および明所において胚軸および根の伸長増加、子葉の肥大などPloidy増加によると考えられる表現型が観察された。このアンチセンス植物体は82個のcDNAをアンチセンスの向きでバルクで形質転換したアンチセンスバルクラインから得られたものであるため、導入されているcDNAが明らかではなかった。そこで、この植物からPCR法により導入されているcDNAを増幅し、塩基配列を決め、導入されているcDNAを同定した結果、この植物にはCRFBに属するF-boxタンパク質遺伝子のcDNAが挿入されいることが明らかになった。次に、このcDNAのアンチセンス効果が本当にPloidy増加に関与しているかを確かめるため、このcDNAを再度野生型植物に導入したアンチセンス植物体を作成した。独立した15個の植物についてPloidyレベルを調べたところ、3ラインで顕著な増加が、暗所および明所芽生えともに観察された。また、胚軸や根の伸長増加や子葉の肥大などバルクラインから得られた植物と同様の表現型を示した。この結果から、CRFBに属するF-boxタンパク質遺伝子のcDNAのアンチセンス効果によりPloidy増加が起こっていると結論した。

This year's annual report shows that there are different types of reports from the previous year. F-box selection of the cDNA of the plasmid is carried out in the following directions: This is the case with the 32C and the 16C. The phenotype was observed in the growth of cotyledons and the elongation of roots. 82 cDNAs were introduced into the plant. The PCR method for the plants was used to amplify cDNA, determine gene alignment, and determine the cDNA sequence for the plants. The PCR method for the plants was used to identify cDNA for CRFB. This cDNA was introduced into wild-type plants and the results were obtained. The 15 plants were planted independently, and the three plants were planted independently. The growth of hypocotyls and cotyledons and the phenotype of plants with the same characteristics are shown. The results show that CRFB belongs to the F-box, and the cDNA of the plasmid increases in Ploidy.

项目成果

Naoki Takahashi, Hirofumi Kuroda, Takashi Kuromori, Takashi, Hirayama, Motoaki Seki, Kazuo Shinozaki, Hiroaki Shimada, Minami Matsui: "Expression and interaction analysis of Arabidopsis Skp1-related genes"Plant and Cell Physiology. 45(1). 83-91 (2004)

Naoki Takahashi、Hirofumi Kuroda、Takashi Kuromori、Takashi、Hirayama、Motoaki Seki、Kazuo Shinozaki、Hiroaki Shimada、Minami Matsui：“拟南芥 Skp1 相关基因的表达和相互作用分析”植物和细胞生理学。