酵母のメタノール誘導性遺伝子発現の分子基盤とその応用利用開発

甲醇诱导酵母基因表达的分子基础及其应用开发

• 批准号: 14760048
• 负责人: 由里本 博也
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14760048/
• 关键词: メタノール; Candida boidinii; Pichia pastoris; アルコールオキシダーゼ; ジヒドロキシアセトンシンターゼ; プロモーター; 遺伝子発現調節; 転写因子; ホルムアルデヒド

メタノール資化性酵母Candida boidiniiのメタノール誘導性遺伝子のうち、前年度のアルコールオキシダーゼ遺伝子(AOD1)、ジヒドロキシアセトンシンターゼ遺伝子(DAS1)に続き、ギ酸デヒドロゲナーゼ遺伝子(FDH1)プロモーターのメタノール応答領域(cis-element)を決定した。これら3つのプロモーターのメタノール応答領域に特異的に結合する転写因子(trans-activator)をゲルシフトアッセイにより探索したところ、DAS1プロモーターについてのみその存在が確認できた。AOD1,FDH1プロモーターの応答領域については、応答領域に特異的に結合するタンパク質の存在が確認されなかった。DAS1プロモーターのメタノール応答領域に結合するタンパク質については、ゲルシフトアッセイを指標にして当該タンパク質の単離を試みている。同じくメタノール資化性酵母であるPiohia pastorisにgene-tagging法を適用し、メタノール生育能を失った変異株を多数取得した。得られた変異株の変異原因遺伝子を特定し、各種データベースと比較することにより、DNA結合能を有すると考えられるZinc finger motifを保つタンパク質を見出した。この相同遺伝子をC.boidiniiよりクローニングしたところ、その推定アミノ酸配列はP.pastorisの当該遺伝子およびSaccharomyces cerevisiaeの推定転写活性化因子と高い相同性を示した。C.boidiniiにおいてこの遺伝子を破壊した株ではAOD1プロモーター活性が顕著に低下していた。今後本遺伝子産物を精製し、AOD1プロモーターのどの領域に結合するかを明らかにして行く。

The yeast Candida boidinii is sensitive to human health, the previous year is not the same as the previous year, and the previous year is not the same as that of the previous year. There is a significant difference between the two groups (AOD1), the previous year (cis-element), and so on. In this connection, we need to know that the combination of writing factors (trans-activator) for domain specific information is related to the need to explore, DAS1 and verify that there is a request for information. The combination of AOD1,FDH1 information and special information exists to confirm that there is a problem. The DAS1 information system is required to respond to the field information. This is the most important thing in the world. In the same way, most of the fertile and fertile strains were obtained by using Piohia pastoris gene-tagging method. The results show that the cause of the disease is specific, the results of all kinds of tests are different, and the combination of DNA and Zinc finger motif can be used to ensure the accuracy of the system. Write the activation factor "high homogeneity" by writing activation factor "C.boidinii", "Saccharomyces cerevisiae" presumption, "P.pastoris", "presumption", "acid", "acid", "acid". The C.boidinii plant was broken. The AOD1 plant was broken. The activity of the plant was low. In the future, we will combine the field of information management and AOD1 information management in order to provide information on how to do business.

项目成果

Yurimoto, H., Lee, B., Yano, T., Sakai, Y., Kato, N.: "Physiological role of S-formylglutathione hydrolase in C_1-metabolism of the methylotrophic yeast Candida boidinii"Microbiology. 149(8). 1971-1979 (2003)

Yurimoto, H.、Lee, B.、Yano, T.、Sakai, Y.、Kato, N.：“S-甲酰谷胱甘肽水解酶在甲基营养酵母博伊丁假丝酵母 C_1 代谢中的生理作用”微生物学。

由里本博也, 阪井康能, 加藤暢夫: "メチロトローフのホルムアルデヒド対策"化学と生物. 41(4). 218-221 (2003)

Hiroya Yurimoto、Yasuyoshi Sakai、Nobuo Kato：“甲基营养菌的甲醛对策”，化学与生物学，218-221（2003）。

阪井康能, 由里本博也: "メタノール資化性酵母Pichia pastorisのゲノム解析「ゲノミクス・プロテオミクスの新展開」"エヌ・ティー・エス(印刷中). (2004)

Yasuyoshi Sakai、Hiroya Yurimoto：“甲醇同化酵母毕赤酵母的基因组分析“基因组学和蛋白质组学的新进展””NTS（印刷中）。

Komeda, T., Yurimoto, H., Kato, N., Sakai, Y., Kondo, K.: "Cis-acting elements sufficient for induction of FDH1 expression by formate in the methylotrophic yeast Candida boidinii"Mol.Gen.Genet.. 270(3). 273-280 (2003)

Komeda, T.、Yurimoto, H.、Kato, N.、Sakai, Y.、Kondo, K.：“顺式作用元件足以在甲基营养酵母博伊丁假丝酵母中诱导 FDH1 表达”Mol.Gen.Genet

Yurimoto, H., Lee, B., Yasuda, F., Sakai, Y., Kato, N.: "Alcohol dehydrogenases that catalyse methyl formate synthesis participate in formaldehyde detoxification in the methylotrophic yeast Candida boidinii"Yeast. 21. 341-350 (2004)

Yurimoto, H.、Lee, B.、Yasuda, F.、Sakai, Y.、Kato, N.：“催化甲酸甲酯合成的乙醇脱氢酶参与甲基营养酵母博伊丁假丝酵母中的甲醛解毒”。