KRAZ及びKAP-1のヘテロクロマチン領域における転写抑制メカニズムの解析

KRAZ和KAP-1异染色质区域转录抑制机制分析

• 批准号: 14770052
• 负责人: 松田 永照
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770052/
• 关键词: KRAB domain; KAP-1; co-repressor; HP1; セントロメリックヘテロクロマチン; TSA; gene-trap; BTB domain; KRAB; KRAZ; tet; Chromatin immunoprecipitation; メチル化

1.KRABドメインを持つKruppleタイプのZnフィンガー因子は、KAP-1というco-repressorを介して転写を拗制することが知られている。申請者が単離した二つのKRABドメインを持つKRAZ1とKRAZ2による転写抑制コンプレックスが、KAP-1とHP1を介してセントロメリックヘテロクロマチンに局在することと、この局在能力と転写活性が相関すること、また、この構造を保つためにはTSA感受性の脱アセチル化酵素の活性が必要であることを明らかにした。TSAによるKRAZ・KAP-1の複合体がセントロメリックヘテロクロマチンに局在するHP1との分離を免疫沈降法の実験より明らかにした。2.KRAZ・KAP-1のヘテロクロマチン複合体形成におけるヒストン修飾の役割を検証するため、KRAZとKAP-1の欠失変異体と、tetによるon/off可能なstable lineを用いた。Reporter assay及びChip assayの結果より、KRAZ・KAP-1の転写抑制が9番目リジンメチル化ヒストン3(H3-MeK9)が関与することを確認した。又、TSAと5-azacytidineを用いた実験では、KRAZ・KAP-1によるgene silencing状態の維持にはDNAのメチル化が重要であることが示唆された。3.ヘテロクロマチン領域に局在するBTBドメインを有する転写因子が報告された。申請者はgene-trapを行い、単離同定した新規BTBタンパク質GetBは細胞核に特徴的なドット状がセントロメリックヘテロクロマチン領域に局在することを確認した。GetBの転写抑制には、co-repressorであるCtBPとの結合がヘテロクロマチン領域に共局在することが重要であることを明らかにした。

The 1.KRAB doctor said that he knew that the factors were Krupple, KAP-1, co-repressor, co-repressor, and that he was not aware of the problem. The applicant said that he

项目成果

Eishou, Matsuda: "Expression profiling with arrays of randomly disrupted genes in mouse embryonic stem cells Ieads to in vivo functional analysis"Proceeding of the National Academy of Science of the United States of America. 10. 1073 (2004)

Eishou, Matsuda：“用小鼠胚胎干细胞中随机破坏的基因阵列进行表达谱分析可进行体内功能分析”美国国家科学院院刊。