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ライム病ボレリアポストゲノム戦略-病原性遺伝子破壊による機能解析-

莱姆病疏螺旋体后基因组策略 - 通过致病基因破坏进行功能分析 -

基本信息

批准号：
14770125
负责人：
金田一秀
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Shizuoka Eiwa Gakuin University Junior College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770125/
关键词：
ライム病ボレリアスピロヘータ病原遺伝子トランスポゾン

项目摘要

ボレリア属スピロヘータにおいて、これまで大腸菌に見られるような形質転換、並びに遺伝子組替えは不可能だと考えられてきた。最近、ボレリアの病原性とボレリア内に存在するプラスミドの関係が指摘され、ある種のプラスミドが欠落すると病原性が低下する事が見いだされた。さらに、この病原性が低下(プラスミドが欠落)したボレリアではエレクトロポレーションによるプラスミドの導入ができるという報告がなされた。さらに、病原性に関与すると報告されたプラスミド内の特定の遺伝子が、プラスミドの複製・安定性に関与している事が報告された。現在までにボレリアの特定の遺伝子破壊が報告されつつあるが、トランスポゾンによるランダム破壊の方法はまだ確立されていない。これらの結果を踏まえて、申請者はボレリア内でランダムな遺伝子挿入破壊可能なトランスポゾンベクターの開発を試みている。昨年までに、ベクター上のトランスポザース、薬剤耐性遺伝子のプロモーター領域をボレリア由来flaB遺伝子プロモーターに置換したプラスミドを構築済みである。ボレリアにおけるより効率的な形質転換法の確立を目指して、エレクトロポレーション並びに一次スクリーニング条件の検討を行った。その結果、作成したトランスポゾンベクターを用いたボレリアの遺伝子破壊株は得られなかった。これはボレリア体内で遺伝子組換えよりもベクターのキュアリングが早いためと予想された。最近、ボレリアのプラスミド維持に関する遺伝子が特定され、ボレリアにおいてもDNAのメチラーゼ・制限酵素系が存在する事が報告された。そこで、メチラーゼを破壊したボレリア株を用いて、上記で作成したトランスポゾンベクターによるランダム遺伝子破壊株の取得を試みた。その結果、一次スクリーニングにより、スペクチノマイシン耐性の196株のボレリアコロニーを得る事ができた。現在、得られた全ての株についてトランスポゾン挿入場所の解析を行っているところである。本方法はライム病ボレリアの機能未知遺伝子の機能解析をする上で非常に有用であると期待している。

It's impossible to change the nature of the bacteria. Recently, the pathogenicity and pathogenicity of the virus have been investigated. In addition, the pathogenicity of this disease is low, and it is reported that the disease has been introduced into the body. This report contains information on pathogenicity, replication, and stability of specific genes in the genome. Now it is necessary to establish the method for reporting the loss of specific information. The results of this review will be reviewed and the applicant will be invited to participate in the review process. Last year, the number of species on the list was increased, and the number of species on the list was increased. The establishment of the quality control method for the performance of the system and the discussion of the conditions for the first time are described. As a result, the production of a variety of products is expected to be successful. This is the first time I've ever seen a child. Recently, there have been reports of the existence of DNA restriction enzymes in the presence of specific genes and enzymes related to the maintenance of DNA. In addition to the above, the company has also established a system for the acquisition of new products. The results of the study were as follows: Now, we have to analyze the whole situation. The method is very useful for analyzing the function of the unknown gene.