新規癌関連遺伝子Human Headcaseの発癌および癌進展における分子機構解析

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Drosophila melanogasterにおいて形態形成および細胞分化に関与するheadcase geneのヒトホモログであるHuman headcase gene (hHDC)の解析を行った。1:hHDCの各種消化器癌標本における解析hHDCの各種消化器癌における遺伝子変異および発現低下に関する解析のため、各種消化器癌の凍結標本およびホルマリン固定標本からのDNA、RNAの抽出を行った。DNA検体ではhHDCの遺伝子変異を検索するため、open reading frameを中心に300〜400塩基対の各セグメント毎にPCRを施行し、PCR産物からのシークエンス解析を行った。この解析によりhHDCのexon部分にpolymorphismを確認したが、アミノ酸配列には影響を与えないものであった。高頻度の遺伝子変異は認められなかった。しかし、メチル化特異的PCR解析によるhHDCプロモーター領域のメチル化検索では、複数のメチル化部分が明らかとなり、各種消化器癌における頻度の高いメチル化が認められ、エピジェネティックな変化を確認した。RNA検体ではRT-PCRを施行し、発現状態の解析を進めている。肝臓癌、大腸癌、胃癌の検体において発現低下の傾向が認められ、hHDCと腫瘍血管新生との関与が推測される結果となった。2:hHDC発現実験完全長hHDC cDNAを組み込んだ発現ベクターを作成した。また、各種消化器癌培養細胞においてDNA、RNAの抽出を施行し、hHDC遺伝子変異の有無をPCR産物からのシークエンス解析により行い、発現減弱、消失の有無はRT-PCRにて検索し、感染実験に備えた培養細胞株の背景を解析した。