新規アミロイド前駆体蛋白遺伝子変異による家族性アルツハイマー病の発症機序の解析

新型淀粉样前体蛋白基因突变所致家族性阿尔茨海默病发病机制分析

• 批准号: 14770288
• 负责人: 涌谷 陽介
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770288/
• 关键词: アミロイド前駆体蛋白; D678N変異; トランスジェニックマウス; 特異抗体

最近,我々は新たなアミロイド前駆体蛋白(APP)遺伝子変異を日本人家族性アルツハイマー病(FAD)家系において見出した(APP D678N変異,以下本変異).この変異はアミロイドβ蛋白(Aβ)内部にアミノ酸置換を引き起こす(Asn7-Aβ).これまでAβ内部の変異でアルツハイマー病を呈する家系の報告は稀であり,本変異によるAD発症のメカニズムを解析することは,多くの孤発性ADの発症メカニズムの解明や治療法の開発に役立つものと考えられる.1.トランスジェニックマウス作成に用いるコンストラクトの作成mouse Thy-1 promoterを入手し,コンストラクトを作成した.mouse Thy-1 promoter正常型APPcDNAを組み込みこんだ後,oligo nucleotide directed mutagenesisを用いてAPP D678Nを導入した.また,Swedish変異(KM670/671NL)のみ,あるいはSwedish変異および本変異を同時に導入したコンストラクトも作成した.しかし,Thy-1 promoterでは,過剰発現系の作成がこんなんであったため,現在,InPro Biotechnology社製のCosSHa.Tet cosmid vectorを用いて,コンストラクトの作成およびトランスジェニックマウス確立を目指している.3.Asn7-Aβ特異的抗体の作成および特異度の確認APP D678Nトランスジェニックマウスの脳で発現(あるいは沈着)したAβが,マウスのendogenousなAβではなくAPP D678N変異由来のAsn7-Aβであることを証明するために,Asn7-Aβ特異的抗体の作成が必須であるため,変異Asn7-AβのN末側のペプチド(DAEFRHNSGYEVHHQC)に対するポリクロナール抗体を作成した.この抗体を用いて,合成した正常Aβペプチドと変異Aβペプチドに対してウエスタンブロットを行い,抗体の特異度を確認した.

Recently, we have discovered a new variant of the APP gene in the Japanese familial disorder (FAD) family (APP D678N variant, the following variant). The protein Aβ is a protein that contains an acid substitution (Asn7-Aβ). The family report of Aβ internal variation is rare, the original variation is related to the analysis of AD symptoms, the analysis of AD symptoms is related to the development of treatment method, the study is related to the development of mouse Thy-1 promoter. Mouse Thy-1 promoter APPcDNA was constructed and oligo nucleotide directed mutagenesis was introduced into APPD678N. The Swedish variant (KM670/671NL) is produced simultaneously with the Swedish variant (KM670/671NL) Now, CosSHa.Tet cosmid vector manufactured by InPro Biotechnology Co., Ltd. is in use. Asn7-Aβ specific antibody is produced. Specificity is confirmed. APP D678N T T Asn 7-Aβ specific antibody must be prepared according to the origin of APP D678N. Asn 7-Aβ specific antibody must be prepared according to the origin of APP D 678 N. This antibody is used in the synthesis of normal Aβ protein and the specificity of the antibody is confirmed.

项目成果

Wakutani Y, et al.: "Genetic analysis of vascular factors in Alzheimer's disease"Ann N Y Acad Sci.. 977. 232-238 (2002)

Wakutani Y 等人：“阿尔茨海默病中血管因素的遗传分析”Ann N Y Acad Sci.. 977. 232-238 (2002)