インターロイキン8による表皮角化細胞の増殖・遊走機序の解明

IL-8阐明表皮角质形成细胞的增殖和迁移机制

• 批准号: 14770415
• 负责人: 松本 佳子
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770415/
• 关键词: IL-8; EGF receptor; HB-EGF; shedding; keratinocyte; migration; 表皮角化細胞; インターロイキン8; 表皮成長因子

本研究はインターロイキン8(IL-8)による表皮角化細胞の遊走・増殖機構を解明することである。とくにIL-8によるEGFレセプターの活性化機構にHB-EGFを中心としたEGFレセプターリガンドのshedding(膜型細胞成長因子が酵素により遊離型に変換される機構)がいかに関与しているかについての検討を行った。表皮角化細胞を無血清培養にて培養し、リコンビナントIL-8を添加し、細胞がどの程度遊走するかについてBoyden chamber法を用いて検討したところ、0.3ng/mlの濃度で最大3倍の細胞遊走亢進が認められた。この濃度で細胞を刺激し、蛋白を回収し、EGFレセプターのリン酸化が起こっているかについて抗リン酸化EGFレセプター抗体を用いてウェスタンブロット法で検討した。IL-8を0.3ng/mlの濃度になるように培養液に添加後15分後にはEGFレセプターのリン酸化が認められた。次ぎにこのリン酸化がEGFレセプターリガンドのsheddingにより引き起こされている可能性を検討するため、あらかじめADAMインヒビター(EGFレセプターリガンドのsheddingを起こす酵素として知られている)で処理した後の細胞遊走能を検討したところ、約30%の抑制がみられた。さらに同様の実験をHB-EGF中和抗体、EGFレセプター中和抗体、CRM197(HB-EGF inhibitor),AG1478(EGFレセプターキナーゼインヒビター)でそれぞれ前処理した後の細胞遊走能を検討したところ、すべて約30%の抑制が認められた。以上の結果より、IL-8による細胞遊走の約30%はEGFレセプターの活性化により引き起こされ、そのほとんどは内因性の膜型HB-EGFが酵素により遊離することによるものであることが明かとなった。

This study explains the mechanism of migration and proliferation of epidermal keratinocytes using IL-8 (IL-8).とくにIL-8によるEGFレセプターのactivation mechanismにHB-EGFをcenterとしたEGFレセプターリガンドのshed ding (membrane cell growth factor enzyme free type に変change される mechanism) がいかに关与しているかについての検 Discussion を行った. Epidermal keratinocytes are cultured without serum and cultured with IL-8, and the degree of cell migration is Boyden. In the chamber method, the concentration of 0.3ng/ml and the concentration of 0.3ng/ml are 3 times the maximum.このconcentration でcell stimulation し, protein を recovery し, EGF レセプターのリン acidification がrise こっているThe anti-リン acidified EGF レセプター antibody was tested using the いてウェスタンブロット method. IL-8 was added to the culture medium at a concentration of 0.3ng/ml, and the EGF was acidified 15 minutes later. The second ぎにこのリンacidificationがEGFレセプターリガンドのsheddingによりhin ( EGFレセプターリガンドのsheddingを出こすzymeとして知られていThe ability of cells to migrate after treatment has been reduced by about 30%.さらに同様の実験をHB-EGF neutralizing antibody, EGFレセプターneutralizing antibody, CRM197(HB-EGF inhibitor), AG1478 After pre-treatment, the cell migration can be suppressed by about 30%. The above results indicate that approximately 30% of IL-8 cells migrated and EGF was activated and activated The endogenous membrane-type HB-EGF enzyme is free and free.