真菌による人単球由来樹状細胞からのサイトカイン産生のメカニズムの解明

阐明人单核细胞来源的树突状细胞产生真菌细胞因子的机制

• 批准号: 14770416
• 负责人: 吉田 雄一
• 金额: $ 3.07万
• 依托单位: Fukuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770416/
• 关键词: 樹状細胞; サイトカイン; 抗原提示; 真菌

健常人から得られたPBMCから単球を分離し、GM-CSFおよびIL-4の存在下に5日間培養し、人単球由来樹状細胞(DC)を誘導した。また同時に人の気管支(ATCC 10231)、爪(ATCC 24433)、血液(ATCC 90028)から分離されたCandida albicansの臨床分離株を液体培地にて振盪培養し、酵母形の真菌を回収した後、死菌を作成した。DCおよび真菌(死菌)を1:0.1,1:1,1:10の割合でそれぞれ48時間培養した後、培養したDCを回収し、表面マーカーの発現の変化および培養液中のサイトカインについて検討を行った。フローサイトメトリーにて表面マーカーの分析を行ったところ、驚くべきことにDC上のCD80,CD83,CD86は、カンジダ死菌(真菌刺激)により、濃度依存性に発現の増強を認め、DCが活性化することが明らかになった。一方CD1aの発現は濃度依存性に低下が認められた。ΔMFによる解析ではCD86の発現が最も強く認められた。また同時にELISA法にて産生されるサイトカインの定量を行ったところ、炎症性サイトカインTNF-αやMCP-1,IL-8などのケモカイン、またTh1/Th2の調節に重要な役割を果たすIL-10,IL-12の産生が濃度依存性に認められた(IL-1β,IFNγ産生は認められなかった)。我々の研究により、カンジダ刺激後にはDCの活性化に伴い様々なサイトカイン、ケモカインが産生されることが明らかになった。DCはカンジダに対してマンノースレセプターやβグルカンレセプターなど複数のレセプターを有しており、サイトカイン産生の機構は複雑であるが、今後もさらに研究を継続し、DCの真菌感染症に対する役割を明らかにしたいと考えている。

PBMC from healthy individuals were isolated and cultured for 5 days in the presence of GM-CSF and IL-4, and dendritic cells (DC) from human PBMC were induced. At the same time, the clinical isolates of Candida albicans isolated from human vascular branches (ATCC 10231), claws (ATCC 24433), blood (ATCC 90028) were shaken in liquid culture, yeast-shaped fungi were recovered, and dead bacteria were produced. DC and fungi (dead bacteria) 1:0.1,1:1,1:10 after cutting, culture, DC recovery, surface development, and culture medium. The analysis of the surface area of the DC was carried out in a concentration-dependent manner, and the activation of the DC was detected on CD80, CD83, CD86. The concentration dependence of CD1a expression is low. The analysis of ΔMF shows that CD86 is the most powerful. Simultaneous ELISA assay for the production of IL-10 and IL-12 is an important factor in the regulation of TNF-α, MCP-1,IL-8 and Th1/Th2, and the production of IL-1β and IFN-γ is concentration-dependent. In our research, we found that the activation of DC was accompanied by the activation of DC after stimulation. DC is the most important part of the research on fungal infection in China.