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Mcm10を中心とする高等真核細胞のDNA複製機構の解析

以Mcm10为中心解析高等真核细胞DNA复制机制

基本信息

批准号：
14780498
负责人：
泉雅子
金额：
$ 2.5万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780498/
关键词：
Mcm10 DNA複製細胞周期染色体複製 GFP ユビキチン

项目摘要

Mcm10はDNA複製開始に必須の因子であり、ヒト培養細胞において、細胞周期に依存した細胞内局在の変化、リン酸化状態の変化、蛋白質レベルの変動が観察されている。また、本課題において、Mcm10が複製開始の30分ほど前に複製部位にリクルートされること、また複製開始後に複製部位から遊離することが明らかになり、Mcm10が複製前複合体の活性化に関与することが示唆されている。Mcm10の生化学的性質を明らかにするために、Mcm10を大腸菌やバキュロウイルスで過剰発現させ、精製・解析することを試みた。しかしながら大腸菌で発現させたMcm10は可溶化させることができず、またバキュロウイルスの発現系ではMcm10が分解し、解析に耐えられる精製標品が得られなかった。そこで、試験管内の転写翻訳系を用いてMcm10を合成、精製した。試験管内の転写翻訳系を用いて合成したMcm10は非常に大きな複合体を形成していたが、0.3M NaClで解離してモノマーになった。しかしながら、界面活性剤(1% Triton)では解離しなかった。一方、ヒト培養細胞のMcm10を0.3M NaClで可溶化した場合は、モノマーとして存在していたが、界面活性剤で可溶化した場合は、大きな複合体のまま可溶化された。従って、上記の試験管内の転写翻訳系で観察されたMcm10の挙動は、細胞内でのMcm10の挙動と似ており、何らかの生理的意義を反映しているものと考えられる。本課題における解析から、Mcm10はレプリコンあたり相当数の分子が結合していることが明らかになっており、細胞内でマルチマーを形成し、多くの複製因子と相互作用している可能性が示唆される。

Mcm10 is an essential factor for the initiation of DNA replication, cell cycle dependence, intracellular changes, acidification, protein changes, etc. Mcm10 is involved in the activation of the pre-replication complex 30 minutes before the start of replication and after the start of replication. The biochemical properties of Mcm10 were investigated. Mcm10 is soluble in E. coli, and its production system is decomposed and analyzed. Mcm10 is synthesized and refined by using Mcm10 as a solvent. In the test tube, the compound Mcm10 was synthesized and dissociated from 0.3M NaCl.しかしながら、界面活性剤(1% Triton)では离解しなかった。When Mcm10 of cultured cells is dissolved in 0.3M NaCl, the surfactant is dissolved in the presence of the surfactant. In addition, the physiological significance of Mcm10 in the cell and the physiological significance of Mcm10 in the cell are also reflected. The topic of this study is to analyze the possibility that Mcm10 may interact with multiple replication factors by binding to multiple molecules.