嗅覚レセプタの活性化機構の解明

阐明嗅觉受体的激活机制

• 批准号: 02J20127
• 负责人: 浜名 洋
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J20127/
• 关键词: 嗅覚レセプタ; 機能発現; カルシウムイメージング

本年度は、嗅覚レセプタ(OR)の機能発現の実現に向けていくつかの試みを行った。β2-アドレナリンレセプター(β2-AR)およびドーパミンレセプター(DR)においてはGα15とHEK293に共発現させてCaイメージングによりリガンドに対する応答を得ることに成功している。そこで、ORの機能発現においてボトルネックとなっている細胞膜への移行を改善するため、β2-ARおよびDRとORとのキメラレセプターを作成した。まず、β2-ARのTM3からTM6をORのものに置換したキメラレセプターを作成した(ORの匂い分子結合サイトは膜貫通ドメインのTM3からTM6の領域であると考えられている)。また、DRではカルボキシル末端に特徴的なアミノ酸配列が存在し、その配列を認識してレセプタの膜への輸送を調節しているタンパク質がある事が示されていることから、ORのC末端領域をDRのC末端領域へと置換したキメラレセプタを作成した。そして、これら2種類のキメラレセプタをGα15と共にHEK293細胞へ遺伝子導入し、Caイメージングにより匂い分子への応答を調べたが応答の検出には至らなかった。次に、最近報告されたORの機能発現の改善に成功した論文の方法も検討した。1つはオートファジーの阻害剤3-MAを用いる方法で、3-MAがORの分解を抑え、細胞膜へのORの発現量が増大することが報告されている。もう1つは、ある特定のORをβ2-ARと共発現させると、そのORの細胞膜への発現が劇的に増加することを報告している。これら2つの論文に基づいて実験を行ったがORの応答は得られなかった。現在は嗅覚レセプタの膜輸送に関与する分子シャペロンとして最近発見されたRTPファミリーの発現ベクターを作成し、我々のクローニングしたORの機能解析に有効であるのか検証するための実験を進めている。

This year, the implementation of the functional development of the olfactory press (OR) has been carried out.β2-AR and DR are successful when Gα15 and HEK293 co-occur. The function of OR is to improve the migration of cell membrane.β2-AR TM 3 TM 6 OR In addition, the C-terminal domain of DR is replaced by the C-terminal domain of DR. 2 kinds of protein are introduced into HEK293 cells, and the protein is transferred to the cells. This paper discusses how to improve the function of OR successfully. 1. The method of using 3-MA as the inhibitor of cell membrane, the inhibition of 3-MA as the decomposition of OR, and the increase in the occurrence of OR in cell membrane were reported. 1. Specific OR β2-AR co-occurrence, increased OR membrane co-occurrence, and increased OR β 2-AR co-occurrence 2. In order to improve the quality of the products, we should pay attention to the quality of the products. Now, the molecular structure of the membrane transport system has been recently developed.