鋤鼻神経細胞株を用いた検定系による哺乳類フェロモン分子の探索

使用犁鼻神经细胞系的检测系统搜索哺乳动物信息素分子

基本信息

批准号：
03J01461
负责人：
若林嘉浩
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、マウス鋤鼻神経細胞由来の細胞株を確立し、この細胞株を用いて哺乳類のフェロモン物質の検定系を確立することを目的としている。嗅細胞および鋤鼻細胞は、神経細胞でありながら、一生涯を通じて新たな細胞が分裂し、成熟、死滅を繰り返している。嗅上皮では、globosal basal cellと呼ばれる細胞種が前駆細胞であると考えられているが、鋤鼻細胞の前駆細胞は同定されていない。本研究では、これまでにマウス鋤鼻上皮において、発生過程を通じて分裂細胞の局在をBrdUを用いて解析し、分裂細胞と同期して局在する遺伝子を解析した。その結果、Notch1がBrdU陽性細胞と同一の局在を示すことを明らかにした。Notch1は膜貫通タンパク質であるため、細胞外ドメインに対する抗体を用いて、Notch1発現細胞を分離し、株化するための培養を行っている。一方、マウス鋤鼻細胞由来の細胞株を用いて、他種の哺乳類のフェロモン分子も同定することのできる検定系を確立するためには、マウス以外の哺乳動物の鋤鼻細胞の特性の基礎的なデータが必要であると考えられる。マウスの鋤鼻細胞は、フェロモン受容体遺伝子ファミリー(V1rs, V2Rs)が存在し、各々Gi2およびGoと共役している。しかし、偶蹄類ではV2Rs-Go発現鋤鼻細胞は存在しない。本研究では、シバヤギフェロモン受容機構の研究も同時に行った。その結果、シバヤギでは、フェロモン受容体が鋤鼻上皮だけでなく、嗅上皮にも発現していることが明らかとなった。嗅上皮に発現するフェロモン受容体は、Gi2陽性細胞とGolf陽性細胞の両方に発現していた。この結果から、シバヤギではフェロモン分子が嗅上皮でも受容される可能性が考えられた。またその細胞内情報伝達経路は齧歯類とは大きく異なっていることが明らかとなった。

这项研究旨在建立一种源自小鼠Vo-Nasal神经细胞的细胞系，并建立使用该细胞系测试哺乳动物信息素物质的系统。嗅觉细胞和vonasal细胞是神经元，但新细胞在其一生中划分，成熟和死亡。在嗅觉上皮中，一种称为球体基底细胞的细胞类型被认为是祖细胞，但尚未鉴定出雾化细胞的祖细胞。在这项研究中，我们通过使用BRDU的发育过程分析了细胞在小鼠Vo-Nasal上皮中的定位，并分析了与分裂细胞同步的基因。结果表明，Notch1表现出与BRDU阳性细胞相同的定位。由于Notch1是一种跨膜蛋白，因此针对细胞外结构域的抗体用于分离表达Notch1的细胞并培养它们以形成线条。另一方面，人们认为必须使用源自小鼠vonasal细胞的细胞系来建立一个还可以识别其他哺乳动物的信息素分子的测定系统，以建立一个也可以鉴定出其他哺乳动物的信息素分子，因此必须使用小鼠哺乳动物以外的哺乳动物vonasal细胞的性质基本数据。小鼠VO-NASAL细胞存在于信息素受体基因家族（V1R，V2RS），分别与GI2结合并进行。然而，Arthode中不存在V2RS-GO表达vonasal细胞。在这项研究中，我们还研究了接受混蛋山羊的信息素的机制。结果，据揭示了信息素受体不仅在呕吐鼻上皮中表达，而且在豹山羊的嗅觉上皮中也表达。在嗅觉上皮中表达的信息符号受体在GI2阳性和高尔夫阳性细胞中均表达。这些结果表明，在豹山羊的嗅觉上皮中也可以接受信息素分子。还揭示了细胞内信号通路与啮齿动物的途径大不相同。