軟骨細胞特異的な新規転写因子の単離とその機能解析

一种新型软骨细胞特异性转录因子的分离及其功能分析

• 批准号: 03J02535
• 负责人: 江口 傑徳
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J02535/
• 关键词: 組織再生; 軟骨; 乳癌; CCN2; CTGF; 転写; 核; TRENDIC; MMP-3; 遺伝子発現; Smad; 骨転移; 結合組織成長因子; TGF-β

内軟骨性骨化、乳癌の骨転移、組織再生などへの強い関与が報告されているタンパク質CCN2/CTGFは、それら生命現象の実験的モデルとして多用されている細胞株HCS-2/8やMDA231でもまた高発現しており、そのメカニズムの一つがCCN2プロモーター上のエンハンサーTRENDICとタンパク質(複合体)の相互作用であることは既に我々が論文報告している。その後TRENDIC結合因子を同定するために行ったサウスウェスタンスクリーニングにより得られたcDNAの1つは細胞外基質分解酵素として知られるMMP-3をコードしていた。そこでMMP-3による転写調節について研究を行っている。1.軟骨組織および培養軟骨細胞様細胞株HCS-2./8の免疫染色では、MMP-3は細胞核に局在化していた。2.HCS-2/8の細胞成分を核・細胞質に分画し、ウェスタンブロッティングにより検討したところ、両方の画分にMMP-3が検出された。3.クロマチン免疫沈降により、通常培養条件下のHCS-2/8細胞においてMMP-3が染色体上のCCN2のプロモーター領域(TRENDICを含む)に結合することが分かった。4.TRENDICと核タンパク質複合体の結合は抗MMP-3抗体によって阻害されるというスーパーシフトアッセイの結果からも、MMP-3がTRENDICに結合することが分かる。5.各種細胞株で強制発現したMMP-3は細胞質および核に局在した。この強制発現MMP-3によるCCN2プロモーターの活性化は特定の細胞株でのみ認められた。6.HCS-2/8におけるCCN2のプロモーター活性はMMP-3インヒビターの添加により抑制された。7.質量分析装置を応用することでMMP-3結合性転写調節因子・核輸送因子を同定した。現在上記の結果を統合し、論文発表に向け準備中である。

The cell lines HCS-2/8 and MDA231 are highly developed for the development of endochondral ossification, breast cancer, bone migration and tissue regeneration. The interaction between CCN2 and TRENDIC is reported in this paper. After TRENDIC binding factor is determined, the expression of MMP-3 is determined by cDNA and extracellular matrix degradation enzyme. The MMP-3 gene is regulated by gene expression. 1. Cartilaginous tissue culture and chondrocyte culture cell line HCS-2./ 8. Immunostaining for MMP-3 and MMP-3 was performed in the nucleus. 2. MMP-3 was detected in HCS-2/8 cells by nuclear and cytoplasmic analysis. 3. HCS-2/8 cells were cultured under normal conditions for MMP-3 binding to CCN2 in TRENDIC. 4. TRENDIC and nuclear protein complex binding to anti-MMP-3 antibody, MMP-3 and TRENDIC binding to anti-MMP-3 antibody. 5. MMP-3 was found in various cell strains under stress. The stress expression of MMP-3 in CCN2 cells and the activation of MMP-3 in specific cell lines 6. HCS-2/8 is the most active component of CCN2, and MMP-3 is the most active component of CCN2. 7. MMP-3 binding regulatory factor and nuclear transport factor are determined by mass analyzer. Now the results of the above note are integrated, and the paper is prepared.

项目成果

Collaborative action of M-CSF and CTGF/CCN2 in articular chondrocytes: Possible regenerative roles in articular cartilage metabolism

• DOI: 10.1016/j.bone.2004.10.015
• 发表时间: 2005-05-01
• 期刊: BONE
• 影响因子: 4.1
• 作者: Nakao, K;Kubota, S;Takigawa, M
• 通讯作者: Takigawa, M

Regulation of chicken ccn2 gene by interaction between RNA cis-element and trans-factor during differentiation of chondrocytes.

软骨细胞分化过程中 RNA 顺式元件和反式因子之间的相互作用对鸡 ccn2 基因的调节。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Journal of Biological Chemistry 280
• 作者: Mukudai;Y. et al.
• 通讯作者: Y. et al.

Moritani, N.H. et al.: "Interaction of AP-1 and the ctgf gene : a possible driver of chondrocyte hypertrophy in growth cartilage."J.Bone Miner.Metab.. 21・4. 205-210 (2003)

Moritani, N.H. 等人：“AP-1 和 ctgf 基因的相互作用：生长软骨中软骨细胞肥大的可能驱动因素。”J.Bone Miner.Metab.. 21・4 (2003)。