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中枢性麻酔薬のクロライドホメオスターシスを介するGABA作動性神経伝達調節作用

中枢麻醉药通过氯稳态调节 GABA 能神经传递的作用

基本信息

批准号：
03J02777
负责人：
村木純偉 (山本純偉)
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

ベンゾジアゼピン(BZP)薬ミダゾラム(MDZ)の実験を行った。生後約2週のラットの脳スライス標本を作成し、大脳皮質体性感覚野大脳皮質の錐体細胞にホールセルパッチクランプを行いMDZのシナプス前作用を調べた。また、顕微鏡下で大脳皮質第V層のスライス標本表面でガラス管を振動させニューロンを機械的急性に単離した。これら錐体細胞表面のα7 nACh受容体を蛍光色素でラベルし、共焦点顕微鏡で観察を行った。大脳皮質第V層ではMDZ 1μMの灌流投与により微小シナプス後電流(mIPSC)の頻度が増加した。しかし、他のBZP系薬物ではmIPSCの頻度は増加せず、BZPの拮抗薬の投与によっても抑制されなかったことからシナプス前のGABA_A受容体以外を介した機序であることが示唆された。MDZによるmIPSC頻度増加作用はα7 nACh受容体阻害剤により抑えられた。しかし、ニコチン単独ではmIPSCの頻度は増加しなかったことから、MDZによりα7 nACh受容体が細胞膜へ誘導され、内因性アセチルコリンによりGABAの放出頻度が増加したのではないかと考え、機械的急性単離した錐体細胞にα7 nACh受容体に特異的に結合する蛍光色素でラベルしたAlexa488 αブンガロトキシンを用いて調べた。その結果、MDZにより有意に細胞表面のα7 nACh受容体が増加するのが観察された。また、シナプス終末に特異的に取り込まれる色素FM1-43で共染色したところその増加したα7 nACh受容体の多くがシナプス終末に存在することがわかった。また、MDZによるmIPSCの頻度増加作用はPKC阻害薬によって抑制され、機械的急性単離細胞を用いた実験でもα7 nACh受容体増加がPKC阻害薬によって抑えられたことから、α7 nACh受容体の誘導にはPKCが関与していることが明らかになった。また、更にMDZによるこの作用はGlutamate作動性神経や大脳皮質の他の層のGABA作動性神経では認められず、GABAニューロンのシナプス後nACh受容体にも作用しなかったことから、大脳皮質第V層のGABA作動性神経のシナプス終末に特異的に見られる現象であることが分かった。以上の結果をまとめ、論文にしCerebral Cortexに受理された(in press)。

ベンゾジアゼピン(BZP)薬ミダゾラム(MDZ)の実験を行った. About 2 weeks after birth, the specimen of the specimen is made, and the sexy body of the big skin is the big skin. Pyramidal cell にホールセルパッチクランプを行いMDZ のシナプス former action を Adjustment べた.また, under the microscope, the surface of the large cortical layer V of the specimen was exposed to vibration and mechanical acute separation. The α7 nACh acceptor on the surface of the pyramidal cell is the photopigment of でラベルし, and the confocal microscopic examination is carried out. The frequency of MDZ in layer V of the large cortical layer was increased after perfusion injection of 1 μM micro-injection current (mIPSC).しかし、Other BZP-based drugs ではmIPSC のincrease frequency はせず、BZP antagonism 薬のadministration and によってもされなかったことからシナプス前のGABA_A receptor other than the を introducer した机 sequence であることが说唆された. MDZ has a frequency-increasing effect on mIPSC and an α7 nACh receptor blocking agent.しかし、ニコチン単多ではmIPSCのfrequencyはincreasedplusしなかったことから、MDZによりα7 nACh receptor, cell membrane induction, endogenous GABA Increased emission frequency, acute isolation of mechanical pyramidal cells, α7 nACh receptor specific に binding する荍photopigment でラベルしたAlexa488 αブンガロトキシンを Use いて Adjust べた. The results of その, MDZ により intentionally にα7 nACh receptor on the cell surface がincrease and するのが観看された.また, シナプスFinal にspecific に込まれる pigment FM1-43 co-stained したところそのincrease plus したα7 The existence of nACh receptor is too much.また、MDZによるmIPSC's frequency-increasing effect and PKC blocker⁬によってinhibitionされ、Mechanical acute isolation of cells and its useいた験でもα7 Increasing nACh receptors and PKC blocking, α7 The induction of nACh receptors and PKC are related to the induction of nACh receptors.また、ChangeにMDZによるこの EffectはGlutamate Action Sex God 経や大脳cutaneous GABA's active god, GABA's action god, GABA'sプス后nACh receptor にもfunction しなかったことから、GAB in layer V of the cortex A. The special に见られるphenomenon of the action God's のシナプスfinal に见られるであることが分かった. The above results are accepted and the paper is accepted by Cerebral Cortex (in press).