1分子イメージングによる酵母プリオンの線維形成とその干渉因子の解析

单分子成像分析酵母朊病毒原纤维形成及其干扰因素

• 批准号: 03J03471
• 负责人: 井上 雄嗣
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J03471/
• 关键词: プリオン; アミロイド; 分子シャペロン

プリオンとは,タンパク質が正常型から異常型に構造変換する事によって伝播する特殊な感染因子である。更に構造変換したプリオンタンパク質同士は重合してアミロイド線維(プリオン線維)を形成する事が知られている。報告者は,酵母由来のプリオン性タンパク質(酵母プリオン)の一つであり,プリオンのモデルタンパク質として広く用いられているSup35を用いて研究を行っている。既に以前の研究によって報告者は,プリオン線維の形成・成長は構造変換過程を伴って起こる事を示した。しかし,プリオンが伝播因子として増殖するためには,一定数の線維が成長するだけでなく,線維が何らかの形で断片化して数を増やす事が必要と考えられた。報告者は,分子シャペロンの一種であるHsp104が異常型Sup35の引き起こす表現型の伝播効率に影響を与える事に着目した。線維断片化のアッセイには,末端を磁性ビーズに結合したSup35線維を用いた。これに酵母細胞ライセートやHsp104を作用させた後,磁気分離によりビーズを回収する。もし断片化が起こっているならばビーズを除いた後の反応液には線維断片が放出されているはずであり,ウェスタンブロットなどにより検出できる。実験の結果,線維断片化にはHsp104単独では不十分であるが必須である事が示された。現在,カラム分画した酵母細胞ライセート,あるいは各種遺伝子破壊株のライセートを用いて同様のアッセイを行うことにより,線維断片化に作用する他の細胞内因子の探索を行っている。

The quality of the disease varies from normal to abnormal, and the structure of the disease varies from infection to infection. In addition, the structure of the change is changed to the quality of the material, and the line dimension is formed. According to the reporter, the origin of yeast and the quality of yeast are studied. Previous studies have shown that the formation, growth, and structural transformation of linear dimensions are accompanied by the initiation of events. A certain number of linear dimensions grow and a certain number of linear dimensions grow. The reporter pointed out that one of the molecular types was Hsp104, and the other was Sup35. The wire is broken and the end is magnetic. After the yeast cells were activated, the magnetic separation was performed. In addition to the above, it is possible to detect the presence of a fragment in the fluid. As a result, the linear fragmentation is not very simple. At present, yeast cells are divided into different types, and various genes are used to explore the role of intracellular factors in yeast cell fragmentation.

项目成果

Infection Route-Independent Accumulation of Splenic Abnormal Prion Protein

脾脏异常朊病毒蛋白的感染途径独立积累

• 发表时间: 2005
• 期刊: Jpn.J.Infect.Dis. 58
• 作者: Y.Inoue;Y.Yamakawa;A.Sakudo;T.Kinumi;Y Nakamura;Y.Matsumoto;K.Saeki;T.Kamiyama;T.Onodera;M.Nishijima
• 通讯作者: M.Nishijima

プリオン線維形成機構

朊病毒原纤维形成机制

• 发表时间: 2004
• 期刊: 蛋白質核酸酵素5月号増刊 Vol.49, No.7
• 作者: Yuji Inoue;井上雄嗣
• 通讯作者: 井上雄嗣

Nicolas Fay, Yuji Inoue, Luc Bousset, Hideki Taguchi, Ronald Melki: "Assembly of the Yeast Prion Ure2p into Protein Fibrils Thermodynamic and Kinetic Characterization"The Journal of Biological Chemistry. 278(32). 30190-30205 (2003)

Nicolas Fay、Yuji Inoue、Luc Bousset、Hideki Taguchi、R​​onald Melki：“酵母朊病毒 Ure2p 组装成蛋白质原纤维的热力学和动力学表征”生物化学杂志。

Hsp104 binds to yeast Sup35 prion fiber but needs other factor(s) to sever it

• DOI: 10.1074/jbc.m408159200
• 发表时间: 2004-12-10
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Inou, Y;Taguchi, H;Yoshida, M
• 通讯作者: Yoshida, M