ALS原因遺伝子が誘導する神経細胞死を抑制する新規因子の解析

我々はグリア細胞培養上清中より分離された神経栄養因子ADNFがALS原因遺伝子SOD1変異体が誘導する神経毒性をin vitro/in vivoにおいて抑制することを世界で初めて報告した(Chiba et al.,JNR 2004)。また新規ALS原因遺伝子ALS2がコードする蛋白alsinがシグナル伝達に関与するとの予想からalsinはADNFのシグナルを担うとの仮説のもと実験を行い、alsinを高発現させることによってin vitroでSOD1の神経毒性をalsin RhoGEF/PI3K/Akt3系路を介して特異的に抑制することを世界で初めて報告した(JBC2004,JBC 2005)。本年度我々はADNFおよびalsinの神経保護作用の詳細な解明を行った。1)ADNFおよびその誘導体の神経保護シグナル経路の解明ADNFは何らかの細胞膜上のレセプターおよびその下流のtyrosine kinaseを介して神経保護作用を発揮すると予想されることから、ANDFと結合する約40kDaの蛋白を精製し、MALDI/TOF法を用いて同定した。現在、ADNFの下流で働くCaMKIVとの機能的相互作用を解明中である。2)in vivoにおけるalsinの神経保護作用の検討野生型alsinトランスジェニックマウスおよびRhoGEF domainに点突然変異を導入した優性抑制型alsin変異体を発現したトランスジェニックマウスを作成した。現在G93A-SOD1トランスジェニックマウスとの交配を進めており、alsinの神経保護作用をin vivoにおいて検討中である。3)alsinの神経保護機構の解明alsinはPI3K/Akt3系路を介してSOD1変異体が誘導する運動神経細胞死を抑制すること(JBC 2005)から、さらにAkt3の下流を同定するために、Akt3の結合因子を酵母ツーハイブリッド法を用いて同定した。この約60kDaの因子はalsin/PI3K/Akt3の神経保護系路のスカフォールド蛋白として働くことが予想されるため、現在RNA干渉法および高発現系を用いてalsinの神経保護作用への関連を検討中である。また、alsinの結合分子をMALDI/TOF法を用いて同定し、その機能解析を行っている。

我々はグリア細胞培養上清中より分離された神経栄養因子ADNFがALS原因遺伝子SOD1変異体が誘導する神経毒性をin vitro/in vivoにおいて抑制することを世界で初めて報告した(Chiba et al.,JNR 2004)。また新規ALS原因遺伝子ALS2がコードする蛋白alsinがシグナル伝達に関与するとの予想からalsinはADNFのシグナルを担うとの仮説のもと実験を行い、alsinを高発現させることによってin vitroでSOD1の神経毒性をalsin RhoGEF/PI3K/Akt3系路を介して特異的に抑制することを世界で初めて報告した(JBC2004,JBC 2005)。本年度我々はADNFおよびalsinの神経保護作用の詳細な解明を行った。1)ADNFおよびその誘導体の神経保護シグナル経路の解明ADNFは何らかの細胞膜上のレセプターおよびその下流のtyrosine kinaseを介して神経保護作用を発揮すると予想されることから、ANDFと結合する約40kDaの蛋白を精製し、MALDI/TOF法を用いて同定した。現在、ADNFの下流で働くCaMKIVとの機能的相互作用を解明中である。2)in vivoにおけるalsinの神経保護作用の検討野生型alsinトランスジェニックマウスおよびRhoGEF domainに点突然変異を導入した優性抑制型alsin変異体を発現したトランスジェニックマウスを作成した。現在G93A-SOD1トランスジェニックマウスとの交配を進めており、alsinの神経保護作用をin vivoにおいて検討中である。3)alsinの神経保護機構の解明alsinはPI3K/Akt3系路を介してSOD1変異体が誘導する運動神経細胞死を抑制すること(JBC 2005)から、さらにAkt3の下流を同定するために、Akt3の結合因子を酵母ツーハイブリッド法を用いて同定した。この約60kDaの因子はalsin/PI3K/Akt3の神経保護系路のスカフォールド蛋白として働くことが予想されるため、現在RNA干渉法および高発現系を用いてalsinの神経保護作用への関連を検討中である。また、alsinの結合分子をMALDI/TOF法を用いて同定し、その機能解析を行っている。