出芽酵母ATM関連因子Tel1によるDNA損傷認識機構の解明

酿酒酵母ATM相关因子Tel1对DNA损伤识别机制的阐明

• 批准号: 03J50421
• 负责人: 中田 大介
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J50421/
• 关键词: チェックポイント; 細胞周期; Mec1; Tel1

Tel1と結合する因子をTwo-hybrid法を用いて探索した結果、Xrs2が得られた。昨年、Xrs2がTel1のDNA損傷部位への結合を制御することを発表した。xrs2破壊株と比べてtel1破壊株はDNA損傷応答異常の表現型が弱いため、Xrs2はTel1以外の因子をも制御している可能性が考えられた。その候補としてMec1が挙げられる。Mec1はTel1と重複してDNA損傷応答を制御している因子である。Mec1とXrs2の関係を明らかにするため、以下の実験を行った。Rad53はDNA損傷に応答してMec1、Tel1依存的にリン酸化され、活性化することが知られている。まず、DNA損傷依存的なRad53のリン酸化を、mec1、tel1、xrs2各破壊株において解析した。その結果、Rad53のリン酸化はmec1破壊株では大きく減少し、tel1破壊株では正常に見られ、xrs2破壊株では部分的に減少することが分かった。このことからXrs2はMec1経路を部分的に制御していると示唆された。Exo1はエキソヌクレアーゼ活性を持つタンパクであり、DNA損傷修復においてXrs2と重複して機能している。Exo1がXrs2と重複してMec1経路を制御している可能性をRad53のリン酸化を指標に検討した。その結果、xrs2破壊株で見られたRad53の弱いリン酸化はxrs2 exo1二重破壊株では見られなかった。次にクロマチン免疫沈降法を用いてMec1のDNA損傷部位への結合がXrs2とExo1に制御されているか検討した。その結果、Mec1のDNA損傷部位への結合はxrs2破壊株では部分的に減少し、xrs2 exo1二重破壊株では検出限界以下であった。以上の結果から、Xrs2とExo1はMec1のDNA損傷部位への結合を促進することでDNA損傷応答を制御していると考えられる。

The Tel1と combined with the する factor をTwo-hybrid method を was used to explore the た た results with て て, and Xrs2が obtained られた. Last year, the DNA damage site of Xrs2がTel1 へ binds to を to control する とを とを and caused た た. Xrs2 broken 壊 strains と than べ て tel1 broken 壊 strains は DNA damage 応 a abnormal phenotypes の が weak い た め, xrs2 は tel1 の outside factor を も suppression し て い る possibility が exam え ら れ た. Youdaoplaceholder0 が挙げられる と て てMec1が挙げられる. Mec1 応 Tel1と repeats て てDNA damage 応 answer を controls <s:1> て る る factor である. Mec1とXrs2 <s:1> the relationship is を and ら にするため にするため, the following <s:1> experiment を line った. DNA damage Rad53 は に 応 answer し て Mec1, Tel1 dependent に リ ン acidification さ れ, active す る こ と が know ら れ て い る. Youdaoplaceholder0, DNA damage-dependent なRad53 <s:1> リ <s:1> acidified を, mec1, tel1, xrs2 each broke 壊 strains にお て て analysis of た. そ の results, Rad53 の リ ン acidification は mec1 broken 壊 strains で は big き く reduce し, tel1 壊 strains で は normal に see ら れ, xrs2 壊 strains で は part に reduce す る こ と が points か っ た. Youdaoplaceholder3 control of the を section of the <s:1> Xrs2 された Mec1 channel に control of <s:1> て ると ると ると indication of された. Exo1 は エ キ ソ ヌ ク レ ア ー ゼ active を hold つ タ ン パ ク で あ り, DNA damage repair に お い て Xrs2 と repeat し て function し て い る. Exo1 が Xrs2 と repeat し て Mec1 経 road を suppression し て い る possibility を Rad53 の リ ン acidification を index に beg し 検 た. そ の results, xrs2 壊 strains で see ら れ た Rad53 の weak い リ ン acidification は xrs2 exo1 double broken 壊 strains で は see ら れ な か っ た. Time に ク ロ マ チ ン を immune sink method with い て Mec1 の DNA injury へ の combining が Xrs2 と Exo1 に suppression さ れ て い る か beg し 検 た. そ の results, Mec1 の DNA injury へ の combining は xrs2 broken 壊 strains で は part に reduce し, xrs2 exo1 double broken 壊 strains で は 検 out under limit で あ っ た. の above results か ら, Xrs2 と Exo1 は Mec1 の DNA injury へ の combining を promote す る こ と で DNA damage 応 answer を suppression し て い る と exam え ら れ る.

项目成果

Association of Rad 9 with Double-Strand Breaks through a Mec 1-Dependent Mechanism

Rad 9 与双链的结合突破了 Mec 1 依赖性机制

• 发表时间: 2004
• 作者: T. Naiki;Tatsushi Wakayama;D. Nakada;Kunihiro Matsumoto;K. Sugimoto
• 通讯作者: K. Sugimoto

Requirement of the Mre11 complex and exonuclease 1 for activation of the Mec1 signaling pathway

• DOI: 10.1128/mcb.24.22.10016-10025.2004
• 发表时间: 2004-11-01
• 期刊: MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY
• 影响因子: 5.3
• 作者: Nakada, D;Hirano, Y;Sugimoto, K
• 通讯作者: Sugimoto, K

中田 大介, 松本 邦弘, 杉本勝則: "ATM-related Tel1 associates with double strand breaks through an Xrs2-dependent mechanism"Genes and Development. 17巻16号. 1957-1962 (2003)

Daisuke Nakata、Kunihiro Matsumoto、Katsunori Sugimoto：“ATM 相关 Tel1 与双链突破 Xrs2 依赖机制”，《基因与发展》第 17 卷，第 16 期。1957-1962 (2003)