出芽酵母ATM関連因子Tel1によるDNA損傷認識機構の解明

Tel1と結合する因子をTwo-hybrid法を用いて探索した結果、Xrs2が得られた。昨年、Xrs2がTel1のDNA損傷部位への結合を制御することを発表した。xrs2破壊株と比べてtel1破壊株はDNA損傷応答異常の表現型が弱いため、Xrs2はTel1以外の因子をも制御している可能性が考えられた。その候補としてMec1が挙げられる。Mec1はTel1と重複してDNA損傷応答を制御している因子である。Mec1とXrs2の関係を明らかにするため、以下の実験を行った。Rad53はDNA損傷に応答してMec1、Tel1依存的にリン酸化され、活性化することが知られている。まず、DNA損傷依存的なRad53のリン酸化を、mec1、tel1、xrs2各破壊株において解析した。その結果、Rad53のリン酸化はmec1破壊株では大きく減少し、tel1破壊株では正常に見られ、xrs2破壊株では部分的に減少することが分かった。このことからXrs2はMec1経路を部分的に制御していると示唆された。Exo1はエキソヌクレアーゼ活性を持つタンパクであり、DNA損傷修復においてXrs2と重複して機能している。Exo1がXrs2と重複してMec1経路を制御している可能性をRad53のリン酸化を指標に検討した。その結果、xrs2破壊株で見られたRad53の弱いリン酸化はxrs2 exo1二重破壊株では見られなかった。次にクロマチン免疫沈降法を用いてMec1のDNA損傷部位への結合がXrs2とExo1に制御されているか検討した。その結果、Mec1のDNA損傷部位への結合はxrs2破壊株では部分的に減少し、xrs2 exo1二重破壊株では検出限界以下であった。以上の結果から、Xrs2とExo1はMec1のDNA損傷部位への結合を促進することでDNA損傷応答を制御していると考えられる。

Tel1と結合する因子をTwo-hybrid法を用いて探索した結果、Xrs2が得られた。昨年、Xrs2がTel1のDNA損傷部位への結合を制御することを発表した。xrs2破壊株と比べてtel1破壊株はDNA損傷応答異常の表現型が弱いため、Xrs2はTel1以外の因子をも制御している可能性が考えられた。その候補としてMec1が挙げられる。Mec1はTel1と重複してDNA損傷応答を制御している因子である。Mec1とXrs2の関係を明らかにするため、以下の実験を行った。Rad53はDNA損傷に応答してMec1、Tel1依存的にリン酸化され、活性化することが知られている。まず、DNA損傷依存的なRad53のリン酸化を、mec1、tel1、xrs2各破壊株において解析した。その結果、Rad53のリン酸化はmec1破壊株では大きく減少し、tel1破壊株では正常に見られ、xrs2破壊株では部分的に減少することが分かった。このことからXrs2はMec1経路を部分的に制御していると示唆された。Exo1はエキソヌクレアーゼ活性を持つタンパクであり、DNA損傷修復においてXrs2と重複して機能している。Exo1がXrs2と重複してMec1経路を制御している可能性をRad53のリン酸化を指標に検討した。その結果、xrs2破壊株で見られたRad53の弱いリン酸化はxrs2 exo1二重破壊株では見られなかった。次にクロマチン免疫沈降法を用いてMec1のDNA損傷部位への結合がXrs2とExo1に制御されているか検討した。その結果、Mec1のDNA損傷部位への結合はxrs2破壊株では部分的に減少し、xrs2 exo1二重破壊株では検出限界以下であった。以上の結果から、Xrs2とExo1はMec1のDNA損傷部位への結合を促進することでDNA損傷応答を制御していると考えられる。