肺癌の5p13増幅領域における標的遺伝子SKP2のアンチセンス法による増殖抑制

目的基因SKP2反义法抑制肺癌5p13扩增区增殖

• 批准号: 03J61539
• 负责人: 石原 左奈 (横井 左奈)
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J61539/
• 关键词: 肺癌; 5p13; 遺伝子増幅; skp2; アンチセンス

1.肺小細胞癌におけるSKP2発現抑制アンチセンス処理により細胞増殖が抑制される時に、DNAの合成能の低下に加え核の断片化が起きていることを明らかにした。FACSによるsub-G1分画の増加およびcaspase-3活性上昇も認め、SKP2の発現抑制によりアポトーシスが誘導されることを示した(Yokoi S Cancer Sci.2003)。この時に発現が変化する遺伝子群をcDNA発現アレイを用いて網羅的に解析した。有意にup-regulateされる遺伝子は124種類、down-regulateされる遺伝子は204種類抽出され、real-time RT-PCR法で検証した。同様にsiRNAを用いたSKP2発現抑制も行い、SKP2に特異的な変化に絞り込むべく検討を行っている。2.非小細胞肺癌におけるSKP2の遺伝子増幅・発現亢進非小細胞癌細胞株のCGH解析においても5p13領域のDNAコピー数の増加は高頻度に認められ、SKP2の増幅と発現亢進に相関を認めた。臨床検体では非腫瘍部と比較し腫瘍部が高値を示した。また、リンパ節転移陽性例はSKP2発現高値群に有意に多く認められた。SKP2のアンチセンス処理により細胞の遊走能、浸潤能はどちらも抑制され、SKP2が転移を促進している可能性を示した(Yokoi S投稿中)。3.非小細胞癌における増幅領域3q26前述の肺非小細胞癌細胞株のCGH解析の結果、最も高頻度の増幅は3q26に検出された。3q26の標的遺伝子は多数報告されているが、中でもテロメア鋳型RNAであるTERCにおいて増幅と発現に強い相関を認め、テロメラーゼ活性も上昇していた。臨床検体の検討からもTERCの発現が非腫瘍部に比較し腫瘍部において特に亢進していた(Yokoi S Clinic Cancer Res 2003)。

1. SKP2 production inhibition in small cell lung cancer is due to the inhibition of cell proliferation, the decrease of DNA synthesis, the increase of nuclear fragmentation, and the development of new technologies. Increased sub-G1 expression and caspase-3 activity in FACS and inhibition of SKP2 expression were also shown (Yokoi S Cancer Sci.2003). This is the first time that a cDNA fragment has been detected. There were 124 species of up-regulated genes, 204 species of down-regulated genes, and real-time RT-PCR. SKP2 gene expression is inhibited by the same siRNA, and SKP2 gene expression is inhibited by the same siRNA. 2. CGH analysis of non-small cell lung cancer cell lines shows that the number of DNA probes in the 5p13 domain increases frequently, and SKP2 gene amplification increases frequently. Clinical examination showed that the tumor area was higher than that of other areas. The positive case of SKP2 is high value. SKP2 gene expression is a potential inhibitor of cell migration and infiltration, and a potential promoter of SKP2 gene expression (Yokoi S submission). 3. The results of CGH analysis of lung NSCLC cell lines described above showed that the highest frequency of increase was found in 3q26. 3q26 target RNA was mostly reported to have increased in amplitude and activity. The development of TERC in clinical diagnosis is not only in the non-cancerous but also in the cancerous (Yokoi S Clinic Cancer Res 2003).

项目成果

Yokoi S: "TERC is a probable target for gene amplification at 3q26 in non-small cell lung cancers"Clinical Cancer Research. 15. 4705-4713 (2003)

Yokoi S：“TERC 可能是非小细胞肺癌 3q26 基因扩增的靶点”临床癌症研究。

Yokoi S: "Down-regulation of SKP2 induces apoptosis in lung-cancer cells"Cancer Science. 94. 344-349 (2003)

Yokoi S：“SKP2 的下调诱导肺癌细胞凋亡”《癌症科学》。