vPARPを介したvaultによる薬剤耐性獲得の分子機構

点击翻译按钮获取中文摘要

Vaultは13MDaの巨大なオルガネラであるが、その生理機能は不明である。Vaultは三種類の蛋白質(LRP/MVP、vPARP、TEP1)と低分子RNA(vRNA)から構成されている。MVPは単独でVault様粒子を構成でき、VaultがP-glycoproteinの発現していない薬剤耐性細胞株に高発現することがわかっている。しかしながら、MVPの発現レベルと薬剤耐性や臨床での予後との関係については議論のあるところである。我々は様々な刺激、特に抗がん剤の処理による細胞内のMVPの変化を調べた。まず大腸がん細胞株SW620をdoxorubicinなどで処理し、24時間内に蛋白質レベルが5倍以上増加することを見出した。MVPの増加が蛋白質の安定性の増加によるのかmRNA合成の亢進によるのかを解明するために、MVP蛋白質の安定性をアイソトープ代謝ラベル法で調べ、mRNA量をreal-time PCRで調べた。MVPが安定な蛋白質で半減期が3日間以上であること、抗がん剤の処理によってMVP mRNAレベルが増加することを明らかにした。抗がん剤によるMVPの転写亢進には、MVPのpromoter領域のどの部分が重要かを調べるためにMVPのpromoterの領域のdeletion mutantを作ってLuciferase Assayで調べているところである。