ゼブラフィッシュを用いた新規スルファターゼ遺伝子の形態形成における役割の解析

ゼブラフィッシュにおけるZsulfFPとShhの関係について明らかにするために、shh mRNAを過剰発現させた胚、またhedgehogシグナルを阻害するcyclopamine処理した胚におけるZsulfFPの発現を調べた。ZsulfFP1はshh mRNAを過剰発現させた胚では頭部での発現が背側に広がり、体節での発現が減少したが、cyclopamine処理した胚では逆に頭部での発現が減少し、体節での発現が増加していた。一方、ZsulfFP2はshh mRNAを過剰発現させた胚では全体的に発現が増加し、cyclopamine処理した胚では全体的に発現が減少していた。さらに、hedgehogシグナルに異常を持つ変異体を用いて、ZsulfFP発現を調べた。sonic-you、slow-muscle-omitted、you-tooにおいてZsulfFP1は頭部での発現が減少し、体節での発現が増加していた。またZsulfFP2の発現は、全体的に減少していた。以上の事からZsulfFP遺伝子の発現がhedgehogシグナルにより部位特異的に調節されている事が明らかになった。しかも体節におけるZsulfFP1の発現調節はウズラの結果と全く反対の結果であり、生物種によって異なる遺伝子発現調節を受けている事が明らかとなった。またsulfFPの機能を明らかにする為に、モルフォリノ・アンチセンス・オリゴを用いた機能欠損実験を行った。現在までのところ機能欠損した胚において形態形成、脊髄中の細胞運命決定及び神経走行に異常は見られていない。さらにZsulfFP1 mRNAとスルファターゼ活性化に必須なSUMF1との共過剰発現実験を行ったところ、受精後5日目胚において、逃避運動に異常が見られた。現在この原因について調査している。

ゼブラフィッシュにおけるZsulfFPとShhの関係について明らかにするために、shh mRNAを過剰発現させた胚、またhedgehogシグナルを阻害するcyclopamine処理した胚におけるZsulfFPの発現を調べた。ZsulfFP1はshh mRNAを過剰発現させた胚では頭部での発現が背側に広がり、体節での発現が減少したが、cyclopamine処理した胚では逆に頭部での発現が減少し、体節での発現が増加していた。一方、ZsulfFP2はshh mRNAを過剰発現させた胚では全体的に発現が増加し、cyclopamine処理した胚では全体的に発現が減少していた。さらに、hedgehogシグナルに異常を持つ変異体を用いて、ZsulfFP発現を調べた。sonic-you、slow-muscle-omitted、you-tooにおいてZsulfFP1は頭部での発現が減少し、体節での発現が増加していた。またZsulfFP2の発現は、全体的に減少していた。以上の事からZsulfFP遺伝子の発現がhedgehogシグナルにより部位特異的に調節されている事が明らかになった。しかも体節におけるZsulfFP1の発現調節はウズラの結果と全く反対の結果であり、生物種によって異なる遺伝子発現調節を受けている事が明らかとなった。またsulfFPの機能を明らかにする為に、モルフォリノ・アンチセンス・オリゴを用いた機能欠損実験を行った。現在までのところ機能欠損した胚において形態形成、脊髄中の細胞運命決定及び神経走行に異常は見られていない。さらにZsulfFP1 mRNAとスルファターゼ活性化に必須なSUMF1との共過剰発現実験を行ったところ、受精後5日目胚において、逃避運動に異常が見られた。現在この原因について調査している。