Ewing肉腫の新規キメラ遺伝子CIC-DUX4の機能解析

尤文肉瘤新型嵌合基因CIC-DUX4的功能分析

• 批准号: 03J61594
• 负责人: 山口 修一
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J61594/
• 关键词: 染色体転座; キメラ; Ewing肉腫; CIC; DUX4; EWS; POU5F1; Fli-1

染色体転座t(4;19)(q35;q13)を有するEwing肉腫において、BAC cloneを用いたFISH法、サザン法、ゲノムライブラリーのスクリーニングおよびRACE法等の手法を用いて、新規キメラ遺伝子CIC-DUX4を同定し、その遺伝子と蛋白の構造を明らかにした。このキメラには、大半のEwing肉腫で認められるEWS-Etsキメラとの構造上の関連性が認められなかった。4q35側の切断点が顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーの責任領域内に位置するサブテロメア領域であるD4Z4 repeat内にあることからこのrepeatの分断が周囲の遺伝子発現を変化させることで発がん機構の一端を担っている可能性が示唆された。さらに、染色体転座t(6;22)(p21;q12)を有する悪性軟部腫瘍の症例が得られたので解析した。サザン法、3'-RACE法、long PCR法等の手法により、EWS遺伝子とES細胞の未分化能の維持に関わる転写因子であるPOU5F1遺伝子のキメラ転写産物を同定しゲノム上の転座切断点を特定した。POU5F1の転写制御機構の異常が発がん機構に重要である可能性が考えられた。また染色体転座モデルマウスについては、まず始めに、Ewing肉腫で最も多く認められるEWS遺伝子とFLI-1遺伝子の転座モデルマウスの作製を試みた。マウスのES細胞よりゲノムライブラリーを作製し、それから転座の対象であるマウスEwsとFli-1のゲノムクローンを単離した。ターゲッティングコンストラクトとしてGFPの発現によって転座が生じたことが確認できるように、Ewsではイントロン7にFlox化されたネオマイシン耐性遺伝子(NeoR)およびGFPのORFとpolyA領域を挿入したもの、Fli-1ではイントロン5にプロモーターとFlox化したNeoRを挿入したものを考案し、現在作製途中である。

Chromosome 転 position t(4;19)(q35; Q13) を す る Ewing meat swollen に お い て, BAC clone を with い た FISH, サ ザ ン method, ゲ ノ ム ラ イ ブ ラ リ ー の ス ク リ ー ニ ン グ お よ び RACE method の gimmick を with い て, new rules キ メ ラ posthumous son 伝 CIC - DUX4 を with し, そ の heritage 伝 son の と protein structure を Ming ら か に し た. こ の キ メ ラ に は, most の Ewing meat swollen で recognize め ら れ る EWS - Ets キ メ ラ と の structure on の masato even sex が recognize め ら れ な か っ た. 4 q35 side の cutoff point が face on the shoulder armor type wrist tendons ジ ス ト ロ フ ィ ー の に position responsibility field す る サ ブ テ ロ メ ア field で あ る D4Z4 repeat inside に あ る こ と か ら こ の repeat の breaking が weeks 囲 の posthumous son 伝 発 を now - the さ せ る こ と で 発 が ん institutions の end を bear っ て い が る possibility in stopping さ れ た. さ ら に, chromosome planning t (6, 22) (p21; q12) を す る 悪 soft part swollen sores の disease cases が get ら れ た の で parsing し た. サ ザ ン method, 3 '- RACE, long PCR の gimmick に よ り, EWS but 伝 と の undifferentiated ES cells can の maintain に masato わ る planning write factor で あ る POU5F1 posthumous son 伝 の キ メ ラ product planning write を be し ゲ ノ ム の on planning a cutoff point を specific し た. POU5F1 転 write about the control institution 転 anomaly が occurrence がん institution に important である possibility が examination えられた. ま た chromosome planning a モ デ ル マ ウ ス に つ い て は, ま ず beginning め に, Ewing meat swollen で most も く recognize め ら れ る EWS heritage 伝 son と heritage the FLI agreed - 1 伝 son の planning a モ デ ル マ ウ ス の cropping を try み た. マ ウ ス の ES cells よ り ゲ ノ ム ラ イ ブ ラ リ ー を as し, そ れ か ら planning a の like で seaborne あ る マ ウ ス Ews と the Fli agreed - 1 の ゲ ノ ム ク ロ ー ン を 単 from し た. タ ー ゲ ッ テ ィ ン グ コ ン ス ト ラ ク ト と し て GFP の 発 now に よ っ て planning a born が じ た こ と が confirm で き る よ う に, Ews で は イ ン ト ロ ン 7 に Flox change さ れ た ネ オ マ イ シ ン patience heritage 伝 child (NeoR) お よ び GFP の ORF と polyA field を scions into し た も の, the Fli agreed - 1 で は イ ン ト ロ <s:1> 5にプロモ タ タ と と とFlox <s:1> たNeoRを in <s:1> た <s:1> を を を study case <e:1>, currently in the process of production である.