高等植物のみに存在する2種類の新規A型DNAポリメラーゼの機能解析

仅存在于高等植物中的两种新型 A 型 DNA 聚合酶的功能分析

• 批准号: 15770031
• 负责人: 木村 成介
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770031/
• 关键词: PolI-like; 葉緑体; DNA修復; DNA複製; 植物; OsPolI-1ike; A型DNAポリメラーゼ; 高等植物; DNA

高等植物のみに存在する新規のA型DNAポリメラーゼ2種類(PolI-like AとPolI-like B)の機能解明することを目的とし研究を進めた。本年度においてはGFP融合蛋白質の一過性発現による細胞局在の解析と、DNAに損傷を与えた時の発現応答の解析を中心に研究を進めた。まず、シロイヌナズナの2種類のA型DNAポリメラーゼ、AtPolI-like AとAtPolI-like Bの翻訳領域の全長とN末端の部分をそれぞれGFPのN末もしくはC末に融合させるコンストラクトを作成した。ベクターはCaMV35S-sGFP(S65T)-nos3'を用いた。コンストラクトをパーティクルガンを用いてタマネギの表皮細胞またはタバコの培養細胞BY-2に導入した。12時間生地することで融合蛋白質を一過性発現させ、蛍光顕微鏡で観察した。その結果AtPolI-like Aは葉緑体に、AtPolI-like Bは葉緑体及びミトコンドリアに局在している可能性が示唆された。次に両遺伝子とDNA修復の関連性を明らかにするために、DNAに傷害を与える紫外線、メタンスルホン酸メチル、過酸化水素水処理により両遺伝子の発現が誘導されるかどうかRT-PCRにより調査した。その結果、AtPolI-like Aの発現が過酸化水素水処理で処理により誘導されることが分かった。今後両遺伝子の解析を進めて行くことで、葉緑体DNA複製・修復におけるA型DNAポリメラーゼの機能が明らかになることが期待される。

There is a new standard in higher plants: type A DNA PolI-like 2 (PolI-like An and B) machines can understand how to improve the purpose of research. This year, we have made progress in the research of the Center for Analysis, DNA Analysis and Analysis of GFP Fusion protein. There are two types of equipment: type A, type A, AtPolI-like B, and AtPolI-like A

项目成果

Yamamoto T. et al.: "Degradation of proliferating cell nuclear antigen by 26S Proteasome in the Oryza sativa strain of rice"Planta. 印刷中.

Yamamoto T. 等人：“水稻品种中 26S 蛋白酶体对增殖细胞核抗原的降解”Planta。

Furukawa et al.: "OsSEND-1 : a new Rad2 nuclease family member in higher plant"Plant Molecular Biology. 51. 59-70 (2003)

Furukawa 等人：“OsSEND-1：高等植物中的新 Rad2 核酸酶家族成员”植物分子生物学。

Ishibashi et al.: "Rice UV-DDB homologues are most abundant in proliferating tissues"Gene. 308. 79-87 (2003)

Ishibashi 等人：“水稻 UV-DDB 同源物在增殖组织中最为丰富”基因。

DNA repair in higher plants; photoreactivation is the major DNA repair pathway in non-proliferating cells while excision repair (nucleotide excision repair and base excision repair) is active in proliferating cells

• DOI: 10.1093/nar/gkh591
• 发表时间: 2004-05-01
• 期刊: NUCLEIC ACIDS RESEARCH
• 影响因子: 14.9
• 作者: Kimura, S;Tahira, Y;Sakaguchi, K
• 通讯作者: Sakaguchi, K

Yamamoto T. et al.: "Characterization of Rad6 from a higher plant, rice (Oryza sativa L.) and its interaction with Sgt1, a subunit of the SCF ubiquitin ligase complex"Biochemical and Biophysical Research Communications. 314. 434-439 (2004)

Yamamoto T. 等人：“来自高等植物水稻 (Oryza sativa L.) 的 Rad6 的表征及其与 Sgt1（SCF 泛素连接酶复合物的一个亚基）的相互作用”生物化学和生物物理研究通讯。