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植物細胞における新規輸送小胞形成機構に関する解析

植物细胞中新型运输囊泡形成机制的分析

基本信息

批准号：
15770036
负责人：
竹内雅宜
金额：
$ 2.3万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770036/
关键词：
小胞輸送植物細胞

项目摘要

研究代表者は,高等植物における細胞内の輸送小胞の形成メカニズムを詳細に解明することを目的として,タバコ培養細胞BY-2を用いたin vitroでの小胞形成解析を行ってきた.これまでにおける研究から,タバコBY-2細胞から抽出した膜画分と細胞質画分に,ATPおよび加水分解しないGTPアナログを加え,30度で30分間保温することで,試験管内で小胞形成反応を再構成することに成功している.COPI小胞ならびにCOPII小胞の積み荷タンパク質と考えられるタバコSec22pの小胞画分への回収が,GTP固定型のアナログの存在によって促進されることから,COPIおよびCOPII小胞の形成が示唆されていた.今回,大腸菌から精製した野生型および優性阻害型変異タバコSar1pをin vitro小胞形成反応に添加した.しかしながら,いずれの場合にも小胞形成効率の顕著な変化は見られなかった.また,ラージスケールで行ったin vitro小胞形成反応の小胞画分の電子顕微鏡観察を行ったが、Sec22pが乗り,COPII状のコートをもった小胞は観察されなかった.以上の結果から,Sec22pのCOPII小胞による出芽の効率は,非常に低く,大部分はCOPII以外の小胞によることが明らかになった.また,細胞膜局在型H^+-ATPaseが,尿素処理した膜画分を用いて小胞形成反応を行った場合にも小胞画分に回収されたため,反応温度,反応時間,反応系のタンパク量などの条件を振りながら,反応の至適条件の検討を行った.その結果,温度に依存した小胞形成反応が起こることが明らかになった.また,その至適温度は30度であった.現在,この条件下で,系のラージスケール化をはかり,目的の小胞のフラクションを単離し,生化学的に解析しているが,今のところ小胞の同定および特定には至っていない.

The representative of the research team analyzed the formation of transport vesicles in cells of higher plants in detail. This study was conducted on COPI-2 cells and COPII-2 cells. The results showed that COPI cells and COPII-2 cells were isolated from the cytoplasm,ATP and GTP were separated from the cytoplasm, ATP and GTP were separated from the cytoplasm, GTP was separated from the cytoplasm. The existence of GTP fixed form of COPI promotes the formation of COPII vesicles. Today, E. coli is purified from wild type to superior resistance type, and the mutant Sar1p is added in vitro cell formation. The cell formation rate is higher than that of normal cells. The cells in the vitro form a mirror, and the electron microscope detects the cells in the vitro, and the COPII cells in the vitro form. The above results show that the germination rate of Sec22p COPII cells is very low, and most of them are not COPII cells. In addition, the cell membrane structure in the form of H^+-ATPase, urea treatment, membrane separation, cell formation, reverse reaction, reverse reaction temperature, reverse reaction time, reverse reaction system, the amount of different conditions for vibration, reverse reaction and optimal conditions for the study. As a result, the temperature dependence of the cell formation is reversed. The temperature is 30 degrees Celsius. Now, under these conditions, the system of classification, classification, separation, biochemical analysis of target cells, identification and specific analysis of target cells.