新規ユビキチンリガーゼHOIL-1のユビキチン化制御機構

新型泛素连接酶HOIL-1的泛素化调控机制

• 批准号: 15770131
• 负责人: 桐浴 隆嘉
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770131/
• 关键词: ユビキチン; ユビキチンリガーゼ; 鉄代謝

HOIL-1は鉄代謝因子の一つIRP2のユビキチンリガーゼとして同定された。このHOIL-1にスプライシングアイソフォームHOIL-1Lが存在し、HOIL-1Lは500~600kDの巨大な複合体を形成する。その複合体を構成するHOIL-1以外の因子としてHOIP(HOIL-1L Interacting Protein)が存在し、HOIPはHOIL-1と同様ユビキチンリガーゼに特徴的なRING構造を有している。本年度では、このHOIL-1L/HOIP複合体が新奇のRING型ユビキチンリガーゼ複合体として機能する可能性を検討した。まずHOIL-1LとHOIPは直接結合することから、HOIL-1LとHOIPの結合に必須なドメインを検索した。HOIL-1Lにはユビキチン様ドメインが、HOIPにはUBA(Ubiquitin Associated Domain)様ドメインが存在する。この両ドメインがHOIL-1LとHOIPの結合を担っていることをドメイン欠損変異体を用いた結合実験により明らかにした。また、HOIL-1L同士、HOIP同士が結合することも分かり、HOIL-1L/HOIP複合体にはHOIL-1LとHOIPがそれぞれ二分子以上存在することが示唆された。さらに、HOIL-1L/HOIP複合体がポリユビキチン化されたタンパク質と結合することを見いだした。この結果を踏まえ、HOIL-1L/HOIP複合体がユビキチンを認識しユビキチン化する可能性を調べた。昆虫細胞から調製したHOIL-1L/HOIP複合体と大腸菌から調製した偽基質Ub-GST(ユビキチンをGSTのN末に融合させたタンパク質)を用いてin vitroユビキチン化実験を行った。その結果、Ub-GSTがポリユビキチン化されることが分かり、現在ポリユビキチン鎖形成という一つのHOIL-1L/HOIP複合体の機能同定にまで至っている。

HOIL-1 <s:1> iron metabolic factor <s:1> <s:1> IRP2 <s:1> ユビキチ リガ リガ ゼと ゼと て された された. こ の HOIL - 1 に ス プ ラ イ シ ン グ ア イ ソ フ ォ ー ム HOIL が し, 1 l l は HOIL - 1 500 ~ 600 kd の huge な complex を form す る. そ の complex を constitute す る HOIL - 1 outside の factor と し て HOIP (HOIL - 1 l Interacting Protein) が し, HOIP は と HOIL - 1 with others ユ ビ キ チ ン リ ガ ー ゼ に of 徴 な を RING structure have し て い る. This year で は, こ の HOIL - 1 l/HOIP complex が novel の RING type ユ ビ キ チ ン リ ガ ー ゼ complex と し て function す る possibility を beg し 検 た. ま ず HOIL - 1 l と HOIP は directly combined す る こ と か ら, HOIL - 1 l と HOIP の must combine に な ド メ イ ン を 検 cable し た. HOIL - 1 l に は ユ ビ キ チ ン others ド メ イ ン が, HOIP に は UBA (Ubiquitin Associated Domain) others ド メ イ ン が exist す る. こ の struck ド メ イ ン が HOIL - 1 l と HOIP の combining を bear っ て い る こ と を ド メ イ ン owe loss - variant を with い た combination be 験 に よ り Ming ら か に し た. ま た, HOIL - 1 l with, HOIP with James が す る こ と も points か り, HOIL - 1 l/HOIP complex に は HOIL - 1 l と HOIP が そ れ ぞ れ exist more than two molecules す る こ と が in stopping さ れ た. さ ら に, HOIL - 1 l/HOIP complex が ポ リ ユ ビ キ チ ン change さ れ た タ ン パ ク qualitative と combining す る こ と を see い だ し た. Tread こ の results を ま え, HOIL - 1 l/HOIP complex が ユ ビ キ チ ン を know し ユ ビ キ チ ン change す る possibility を adjustable べ た. Insect cell か ら modulation し た HOIL - 1 l/HOIP complex と coliform か ら modulation し た pseudo matrix Ub - GST (ユ ビ キ チ ン を に fusion at the end of the GST の N さ せ た タ ン パ ク qualitative) を with い て in vitro ユ ビ キ チ ン change be 験 を line っ た. そ の results, Ub - GST が ポ リ ユ ビ キ チ ン change さ れ る こ と が points か り, now ポ リ ユ ビ キ チ ン lock forming と い う a つ の HOIL - 1 l/HOIP complex の function with fixed に ま で to っ て い る.

项目成果

Identifidation, expression and assay of an oxidation-specific ubiquitin ligase, HOIL-1

氧化特异性泛素连接酶 HOIL-1 的鉴定、表达和测定

• 期刊: Methods in Enzymology (Ubiquitin and protein degradation, Part A) Vol.398(In press)
• 作者: Iwai;K.;Ishikawa;H.;Kirisako;T.
• 通讯作者: T.

桐浴隆嘉, 岩井一宏: "鉄代謝とユビキチンシステム"細胞工学. 22・8. 866-871 (2003)

Takayoshi Kiriyoku，Kazuhiro Iwai：“铁代谢和泛素系统”细胞工程22・871（2003）。

鉄代謝とユビキチンシステム

铁代谢和泛素系统

• 发表时间: 2003
• 期刊: 細胞工学 21(6)
• 作者: 桐浴隆嘉;岩井一宏
• 通讯作者: 岩井一宏