線虫C.elegansの生殖に働くRNA結合蛋白質と関連因子の機能解析と利用

在线虫繁殖中发挥作用的RNA结合蛋白及相关因子的功能分析和利用

• 批准号: 15770139
• 负责人: 辛島 健
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770139/
• 关键词: 線虫; C.elegans; 生殖腺; 配偶子; 無精子症; RNA結合蛋白質; mRNA

1.DAZ-1蛋白質と標的mRNAとの相互作用の生理学的意義前年度に、ヒト無精子症因子DAZの線虫における相同蛋白質DAZ-1が、線虫の生殖腺内で結合するmRNAを複数同定した。本年度は、それらの中でも特に生殖腺で重要な働きをし、daz-1変異体で発現が顕著に異常であったfbf-1およびgld-1について、遺伝学的な解析を行った。その結果、daz-1遺伝子がGLD-1タンパク質の発現を既知の因子と協調的に促進することが示された。また、fbf-1と同様にdaz-1が生殖細胞の増殖・性決定に関与することが示された。2.DAZ-1蛋白質と相互作用するCPB-3の生化学的・遺伝学的解析DAZ-1蛋白質とin vivoで相互作用するものとして前年度に単離した翻訳制御因子CPB-3がin vivoで結合しているmRNAを生化学的に同定した。前年度に作製したcpd-3遺伝子欠失変異体の遺伝学的な解析結果とあわせて、cpd-3遺伝子が生殖細胞の増殖、性決定および分化の各局面で異なるmRNAに結合して機能することが示唆された。3.mRNA結合蛋白質SQD-1が結合するmRNAの包括的探索前年度に、mRNAの翻訳や局在化に重要であるSquid/hrp40蛋白質の線虫相同蛋白質SQD-1が結合するmRNAの候補を単離した。本年度は、それらのmRNAの3'UTR中からSQD-1が結合するモチーフを生化学的に同定した。線虫の核酸配列データベースから、3'UTR中にそのモチーフを持つ遺伝子を同定するプログラムを作製し、SQD-1の標的となりうるmRNAの候補をリストアップした。現在、それらのmRNAの細胞内局在を生化学的に検討している。

1. The physiological significance of DAZ-1 protein and target mRNA interaction. This year, we will conduct an analysis of the important factors affecting gonads and genetic studies. The results show that the daz-1 gene is a known factor in the development of GLD-1 and a coordinated promoter. Fbf-1 and daz-1 are related to reproductive and sexual determination of germ cells. 2. Biochemical and genetic analysis of DAZ-1 protein interaction with CPB-3 in vivo The results of genetic analysis of cpd-3 gene deficiency in previous years showed that cpd-3 gene expression was different in various aspects of germ cell reproduction, sex determination and differentiation. 3. mRNA binding protein SQD-1 is a candidate for binding to mRNA, including mRNA, which is important in the development of Squid/hrp40 protein and the same protein in the worm. This year, SQD-1 was found in the 3'UTR of the mRNA. The sequence of nucleic acid in the 3'UTR of the parasite is determined by the sequence of genes in the SQD-1 target mRNA. Now, the intracellular structure of mRNA is under investigation in biochemical field.