細胞内セカンドメッセンジャーcyclicGMPの新たな生理機能の探索

细胞内第二信使环状GMP新生理功能的探索

• 批准号: 15780074
• 负责人: 矢中 規之
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15780074/
• 关键词: cyclic GMP; titin; protein kinase; Yeast two-hybrid; cyclic GMP依存性プロテインキナーゼ

1型、および2型cyclic GMP依存性プロテインキナーゼのキナーゼ活性中心におけるD/A変異体を取得し、Yeast two-hybrid法のbaitとして利用することによって、相互作用する因子の探索を行った。マウス精巣、マウス胎児、およびヒト軟骨由来cDNAライブラリーを用いて行った。2型cyclic GMP依存性プロテインキナーゼのD/A変異体をbaitとして用いた場合には、候補クローンを得たが、再度、相互作用の確認を行った結果、擬陽性であることが判明した。しかし、1型cyclic GMP依存性プロテインキナーゼ(PKG1)のD/A変異体をbaitとして用いた場合には、titinが陽性クローンとして単離され、動物細胞における発現によっても両因子の相互作用が確認された。また、PKG1野生型との相互作用が認められなかったことから、titinはリン酸化タンパクであり、リン酸化によってPKG1と解離する可能性が示唆された。さらに、PKG1のdeletion mutantを作製し、相互作用について詳細に検討した。その結果、両者の相互作用は、PKG1のN末端のleucine zipper構造には依存せず、現在までPKG1と相互作用することを見出しているtroponin TやGKAP42とはその性質が異なる点で極めて興味深い。

Type 1, お よ び type 2 cyclic GMP dependency プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ の キ ナ ー ゼ active center に お け る D/A - variant を obtain し, Yeast two hybrid method の bait と し て using す る こ と に よ っ て, interaction す る factor の exploration line を っ た. マ ウ ス 巣, マ ウ ス tire where, お よ び ヒ ト cartilage origin cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を with い て line っ た. Type 2 cyclic GMP dependency プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ の D/A - variant を bait と し て in い た occasions に は, alternate ク ロ ー ン を have た が line, again, interaction の confirm を っ た results, positive で あ る こ と が.at し た. し か し and type 1 cyclic GMP dependency プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ (two packages PKG1) の D/A - variant を bait と し て in い た occasions に は, titin が positive ク ロ ー ン と し て 単 from さ れ, animal cells に お け る 発 now に よ っ て も struck factor の interaction が confirm さ れ た. ま た, two packages PKG1 wild-type と の interaction が recognize め ら れ な か っ た こ と か ら, titin は リ ン acidification タ ン パ ク で あ り, リ ン acidification に よ っ て two packages PKG1 と dissociation す が る possibility in stopping さ れ た. Youdaoplaceholder0, PKG1 deletion mutantを mechanism に, interaction に て て details に検 discuss た た. そ の results, struck の は interaction, two packages PKG1 の N terminal の leucine zipper structure に は dependent せ ず, now ま で two packages PKG1 と interaction す る こ と を shows し て い る troponin T や GKAP42 と は そ の nature が different な る で extreme め て tumblers deep い.