サイトカイニン応答シグナル伝達の可視化:二成分制御因子間の構造と親和性相関解析

细胞分裂素反应信号的可视化:双组分调节剂之间的结构和亲和力相关分析

基本信息

  • 批准号:
    15780219
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.37万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
  • 财政年份:
    2003
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2003 至 2004
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

平成15年度はレスポンスレギュレーター(RR)について、トウモロコシ由来(ZmRR)のアイソフォームZmRR1、ZmRR2の大量発現系の構築がうまくいかなかったため、平成16年度は、異なるアイソフォームの発現系の構築を目指した。その結果、アミノ末端にヒスチジンタグをつけたZmRR3について、大量のサンプルを確保することが可能となった。しかし、このアイソフォームは非常に不安定で、精製したその日から蛋白質が変性し始めていた。4℃で結晶化条件を検索したが、微結晶すら得ることができなかったため、蛋白質の安定化剤であるグリセロールやエチレングリコールをサンプルに添加し、同じく4℃で結晶化条件を検索してもうまくいかなかった。またアイソフォームのヒスチジンタグをプロテアーゼで除去することによって安定性の向上を目指したが、温度が低いとタグがうまく切れず、室温付近で酵素処理すると、アイソフォームがほとんど変性してしまうため、うまくいかなかった。酵母由来のhistidine phospho-transfer protein(HPt)とRRとの蛋白質-蛋白質複合体の立体構造の報告を元に、ドッキングシミュレーションプログラムを用いてトウモロコシ由来のHPt(ZmHP)とZmRRの複合体モデルの構築を試みた。ZmHPの立体構造は、結晶解析によって実験的に得られたものであるのに対して、ZmRRについては、ホモロジーモデリング法によってin silicoで得られたものであるため、得られたモデルについて、リン酸基を授受するヒスチジン(ZmHP)、アスパラギン酸(ZmRR)周辺を見ると、両蛋白質が接触するinterfaceに隙間が空いており、モデルとしての信頼性に疑問の余地がある。
Pp.47-53 15 year は レ ス ポ ン ス レ ギ ュ レ ー タ ー (RR) に つ い て, ト ウ モ ロ コ シ origin (ZmRR) の ア イ ソ フ ォ ー ム ZmRR1, ZmRR2 の large 発 now is の build が う ま く い か な か っ た た め, pp.47-53 16 year は, different な る ア イ ソ フ ォ ー ム の 発 now is の build を refers し た. そ の results, ア ミ ノ end に ヒ ス チ ジ ン タ グ を つ け た ZmRR3 に つ い て, massive の サ ン プ ル を ensure す る こ と が may と な っ た. し か し, こ の ア イ ソ フ ォ ー ム は very で に unrest, refined し た そ の day か ら protein が beginning - sex し め て い た. 4 ℃ で crystallization conditions を 検 cable し た が, micro crystal す ら have る こ と が で き な か っ た た め, protein の stabilization tonic で あ る グ リ セ ロ ー ル や エ チ レ ン グ リ コ ー ル を サ ン プ ル に add し, with じ く 4 ℃ で crystallization conditions を 検 cable し て も う ま く い か な か っ た. ま た ア イ ソ フ ォ ー ム の ヒ ス チ ジ ン タ グ を プ ロ テ ア ー ゼ で remove す る こ と に よ っ て stability の upward を refers し た が, low temperature が い と タ グ が う ま く cut れ ず, room temperature is paying nearly で enzyme 処 す る と, ア イ ソ フ ォ ー ム が ほ と ん ど - sex し て し ま う た め, う ま く い か な か っ た. Yeast origin histidine phospho-transfer Protein (HPt) と RR と の protein - protein complex の three-dimensional structure の report を yuan に, ド ッ キ ン グ シ ミ ュ レ ー シ ョ ン プ ロ グ ラ ム を with い て ト ウ モ ロ コ シ origin の HPt (ZmHP) と ZmRR の complex モ デ ル の build を try み た. ZmHP の three-dimensional structure は, crystallization analytic に よ っ て be 験 に better ら れ た も の で あ る の に し seaborne て, ZmRR に つ い て は, ホ モ ロ ジ ー モ デ リ ン グ method に よ っ て in Silico で have ら れ た も の で あ る た め, ら れ た モ デ ル に つ い て, リ ン acid radical を "す る ヒ ス チ ジ ン (ZmHP), ア ス パ ラ ギ ン acid (ZmRR) weeks 辺 を see る と, struck protein が contact す る interface に interstitial が empty い て お り, モ デ ル と し て の letter 頼 sex に doubt の room が あ る.

项目成果

期刊论文数量(4)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Crystal structure of the histidine‐containing phosphotransfer protein ZmHP2 from maize
  • DOI:
    10.1110/ps.041076905
  • 发表时间:
    2005-01
  • 期刊:
  • 影响因子:
    8
  • 作者:
    H. Sugawara;Y. Kawano;T. Hatakeyama;T. Yamaya;N. Kamiya;H. Sakakibara
  • 通讯作者:
    H. Sugawara;Y. Kawano;T. Hatakeyama;T. Yamaya;N. Kamiya;H. Sakakibara
Characterization of recombinant CEL-I, a GalNAc-specific C-type lectin, expressed in Escherichia coli using an artificial synthetic gene
  • DOI:
    10.1093/jb/mvh012
  • 发表时间:
    2004-01-01
  • 期刊:
  • 影响因子:
    2.7
  • 作者:
    Hatakeyama, T;Shiba, K;Aoyagi, H
  • 通讯作者:
    Aoyagi, H
Characteristic recognition of N-acetylgalactosamine by an invertebrate C-type Lectin, CEL-1, revealed by X-ray crystallographic analysis.
X 射线晶体学分析揭示了无脊椎动物 C 型凝集素 CEL-1 对 N-乙酰半乳糖胺的特征识别。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2004
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Tatsuhiko Kataoka;Naomi Hayashi;Tomoyuki Yamaya;Hideki Takahashi;Tatsuhiko Kataoka et al.;菅原 肇;菅原 肇
  • 通讯作者:
    菅原 肇
Crystal structure of the hemolytic lectin CEL-III isolated from the marine invertebrate Cucumaria echinata : implications of domain structure for its membrane pore-formation mechanism.
从海洋无脊椎动物 Cucumaria echinata 中分离出的溶血凝集素 CEL-III 的晶体结构:结构域结构对其膜孔形成机制的影响。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2004
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Tatsuhiko Kataoka;Naomi Hayashi;Tomoyuki Yamaya;Hideki Takahashi;Tatsuhiko Kataoka et al.;菅原 肇;菅原 肇;内田達也
  • 通讯作者:
    内田達也
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  • 通讯作者:
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  • 通讯作者:
    阿部光知

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