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脂質成長因子受容体EDG-1の血管内皮における発現調節機構の解析

血管内皮脂质生长因子受体EDG-1表达调控机制分析

基本信息

批准号：
15790119
负责人：
五十嵐淳介
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kagawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

スフィンゴシン1リン酸(Sphingosine 1-Phosphate、S1P)は血小板に由来する脂質成長因子であり、血管内皮細胞のG蛋白結合型受容体であるS1P_1(EDG-1)を介して血管新生を促す。申請者は活性酸素分子種(Reactive Oxygen Species、ROS)が内皮細胞におけるS1P_1の発現レベルにどのような影響を与えるか検討した。ウシ大動脈由来の内皮細胞(BAEC)においてROSの一種である過酸化水素を細胞外から投与すると、用量依存的にかつ極めて急性なS1P_1蛋白質発現レベルの増加が観察される(ウエスタンブロット法、刺激後三十分で約十倍、EC_<50>=^〜50μM)。かかる過酸化水素によるS1P_1蛋白質発現レベルの増加はSrcファミリーチロシンキナーゼの阻害剤であるPP2により完全に抑制されたが、過酸化水素はS1P_1のmRNA発現レベルには有意な変化を与えなかった。過酸化水素によって前処置され、S1P_1を多量に発現したBAECでは、S1Pに対する反応性が有意に亢進していた(MAPキナーゼ及び内皮型NO合成酵素のリン酸化レベルはホスホウエスタン法で、また、細胞増殖能は試薬WST-8を用いて検討した)。一方過酸化水素は、内皮細胞に発現するもう一つのS1P受容体サブタイプであるS1P_3受容体の発現レベルには影響しなかった。動脈硬化や炎症などが進行している血管床ではROSの産生が亢進していることが知られているが、これらの結果はそのような条件下で過酸化水素が内皮細胞のS1P_1受容体蛋白質発現増加を介して血管新生を促進させる可能性を示唆するものである。今後、細胞生物学的な手法を用い、過酸化水素によるS1P_1受容体発現増加の生理学的意義をさらに詳しく検討する予定である。

Sphingosine 1-Phosphate (S1P) is a lipid growth factor involved in platelet genesis and a G-protein binding receptor involved in vascular endothelial cells. S1P1 (EDG-1) mediates angiogenesis. The applicant is investigating the effects of Reactive Oxygen Species (ROS) on the development of endothelial cells in S1P1. A kind of ROS in arterial-derived endothelial cells (BAECs) was observed in vitro, dose-dependent and acute S1P1 protein production (EC_<50>=^~ 50μM). S1P_1 protein expression was inhibited completely by PP2, and S1P_1 mRNA expression was inhibited intentionally by PP2. In addition, S1P1 was detected in a large amount in BAEC and S1P was detected in response to the intentional increase in the activity of MAPs and endothelial NO synthase. The development of S1P receptor is influenced by the development of S1P3 receptor. It is known that the production of ROS will increase in the vascular bed where atherosclerosis and inflammation are ongoing, and the results suggest the possibility that hyperacidified water may promote angiogenesis through the increased expression of S1P_1 receptor protein in endothelial cells. In the future, the physiological significance of the increase of S1P1 receptor expression in cell biology and its application will be discussed in detail.