フラジリス菌における複合糖鎖分解遺伝子の病原性発現における役割

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1.B.fragilis YCH46株におけるシアロ複合糖鎖利用に関与する遺伝子領域の解析既に我々が同定した27-kbのシアロ複合糖鎖分解酵素遺伝子群(sguクラスター)の転写単位をRT-PCRによって解析したところ、sguクラスターを構成する13個の構造遺伝子(nanH3、nahA、estA、estS、bmnA、nahB、BF1735、nahC、BF1737、bgaA、BF1739、BF1740、bgaB)は少なくとも単一の転写単位として存在することが示唆された。2.B.fragilis12菌株間におけるsguクラスターB.fragilis菌株間におけるsguクラスターの構造多様性をPCRを用いて検討したところ、試験した12株全ての菌株においてこの領域は保存されていた。このことから、このsguクラスターはB.fragilisの腸管内における糖利用能にとって重要な役割を担っていると考えられた。3.sguクラスターの各構造遺伝子破壊株の作製染色体上の標的遺伝子との相同組換えを介した遺伝子破壊株を作製するために構築した自殺ベクターpKK100(Bacteroides内でエリスロマイシン耐性、大腸菌内でテトラサイクリン耐性)に、sguクラスターの各構造遺伝子の一部を挿入した後、electroporation法によりB.fragilis YCH46株へ導入し、染色体上の標的遺伝子と相同組換えを起こさせ各構造遺伝子欠失破壊株を作製した。また、sguクラスター全てを欠失させた欠失破壊株も作製した。