フラジリス菌の表層抗原性を制御する部位特異的組換え酵素の同定および発現解析

控制脆弱拟杆菌表面抗原性的位点特异性重组酶的鉴定和表达分析

• 批准号: 18790309
• 负责人: 中山 治之
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790309/
• 关键词: Bacteroides fragilis; 表層抗原性; 部位特異的組換え酵素; DNA逆位; SusC; D; Shufflon; 無菌マウス; 莢膜

1.class IIおよびclass VI領域のDNA逆位を制御する候補遺伝子破壊株の作成B.fragilis YCH46株ゲノム上に存在する33個のtyrosine site-specific recombinase(Tyr recombinase)と4つのserinesite-specific recombinase(Ser recombinase)のうちB.fragilis NCTC9343株のゲノム上にも共通して保存されている19個のTyr recombinase遺伝子および2個のSer recombinase遺伝子の欠失株を作製した。得られた遺伝子欠失株についてClass II(10箇所)、V(1箇所)およびVI領域(1箇所)のDNA逆位アッセイを行ったところ、Class V領域内に存在するBF0667 Tyr recombinaseがClass II、VおよびVI領域全てのDNA逆位に関与していることが判明した。つまり、BF0667はゲノム上に散在する3種類の外膜蛋白質SusC/Dクラスター(shufflon様多重逆位領域)を含む計12箇所にも及ぶ領域を包括的に一括制御していることが示唆された。2.BF0667による逆位制御が腸管内への定着に果たす役割BF0667による逆位制御が腸管内への定着に関与しているのかを検討するために、野生株とBF0667欠失破壊株を用い、無菌マウス腸管への競合定着試験を行った。野生株と変異株を1:1で混合し、無菌マウスに経口投与した後、経時的に大腸糞便中の菌数割合を計測したところ、経時的に変異株の割合が減少したことから、BF0667による逆位制御が腸管への定着性に重要であることが示唆された。このようなグローバルな制御系によって、刻々と変化する腸内環境に応じて表層抗原性を変化させ、表層抗原性の組合せレパートリーを増やすことで様々な宿主腸内環境へ適応しているものと考えられる。

1. Creation of candidate gene disruption strains that regulate DNA inversion in the class II and class VI regions Among the 33 tyrosine site-specific recombinases (Tyr recombinases) and four serinesite-specific recombinases (Ser recombinases) present on the B. fragilis YCH46 genome, 19 deletion strains of the Tyr recombinase genes and two Ser recombinase genes, which are also commonly制备了在脆弱的NCTC9343菌株的基因组上保守的。对所得的基因缺失菌株进行了II类（10个位置），V（1个位置）和VI区域（1个位置）的DNA反转测定，发现存在于V类V级区域中的BF0667 Tyr重组酶在所有类别II，V和VI区域中都参与DNA中存在的BF0667 Tyr重组酶。换句话说，有人建议BF0667全面调节了12个区域，其中包括散布在基因组上的三种类型的外膜蛋白SUSC/D簇（Shufflon样的多个逆区）。 2。BF0667在肠道定植中对逆控制的作用，研究BF0667的逆控制是否参与了肠道中的定植，使用野生和BF0667删除损坏的抗菌小鼠肠道对无菌小鼠肠道进行了竞争性殖民测试。在1：1处混合野生和突变菌株，口服对无菌小鼠的口服，随着时间的推移，测量了结肠粪便中细菌的比例，突变菌株的比例随时间降低，这表明BF0667通过BF0667的反演控制对肠结构化很重要。人们认为，通过改变表面抗原性的响应，通过改变表面抗原环境，并增加表面抗原性的组合曲目，可以通过改变表面抗原性来适应各种宿主肠道环境。