Msi-1過剰発現モデル作成およびそれを用いた肝再生促進機構の解明

Msi-1过表达模型的建立及利用其阐明肝再生促进机制

• 批准号: 15790334
• 负责人: 伊藤 純一
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790334/
• 关键词: musashi; 肝再生; トランスフェクション; トランスジェニックマウス; Msi-1

本研究は幹細胞のマーカーとして新たに着目されたMsi-1の肝再生に関わる機能および個々の因子への作用を明らかにすることを目的とする。平成16年度報告書に記載した、再度行われたHepG2細胞へのMsi-1実験は今年度に引継ぎ行われ多数のクローンが作成された。以上より前年度までの研究と合わせ、結果として2種類のプロモーター(サイトメガロウイルスプロモーターおよびserumamyloid P componentプロモーター)をそれぞれ持つ2種類のMsi-1遺伝子は、それぞれラット初代培養肝細胞とHepG2細胞に導入された。1.ラット初代培養肝細胞に対するMsi-1過剰発現。2種類のプロモーターをそれぞれ持つコンストラクトのいずれを導入した場合においても、導入肝細胞は、コントロールに比べ増殖率、経時的減少細胞数に有意な差が認められなかった。また形態的に変化を認めなかった。2.HepG2細胞に対するMsi-1遺伝子の一過性発現導入。ヒト肝癌細胞株であるHepG2細胞では、Msi-1の一過性発現によって明らかな形態的変化を認めなかった。HepG2細胞の増殖率はもともと非常に高く、Msi-1の一過性発現による増殖率変化の検討は困難であった。3.安定細胞株の解析。ベクター内在の薬剤耐性遺伝子を利用したG418による選択的な培養で得られた細胞は、継代されたが、形態的変化を認めず、またウエスタンブロット法で継代された導入HepG2細胞ではMSI蛋白の発現が非常に弱いことが確認された。以上の結果より、HBXプロモーターなどの強力なプロモーターを用いて過剰発現をされることや、またより効率のよいアデノウイルス等を用いた持続感染による過剰発現の手法を用いてMsi-1を十分に発現させる必要性が示唆された。コンストラクト作成時に明らかになったalternate exonについては、欠失部位の補正を行いその存在意義について解析する予定である。

This study aims to clarify the role of Msi-1 in liver regeneration and its function in stem cell development. In the Heisei 16 Annual Report, it was recorded that HepG2 cell line Msi-1 was re-established and that most of the cells were re-established this year. The results of the previous year's study were as follows: 2 types of Msi-1 gene were introduced into primary cultured hepatocytes and HepG2 cells. 1. Msi-1 expression in primary cultured hepatocytes. 2. The number of cells introduced into the liver cells was significantly lower than that of the control group. The shape of the body is changed. 2. Transient expression of Msi-1 gene in HepG2 cells. HepG2 cell line is characterized by transient expression of Msi-1 and morphological changes. The growth rate of HepG2 cells is very high, and the transient occurrence of Msi-1 is difficult. 3. Analysis of stable cell lines. The expression of MSI protein in HepG2 cells was confirmed to be very weak when the gene was introduced into HepG2 cells. The above results demonstrate the necessity of using Msi-1 as a means of maintaining infection and preventing it from occurring. When creating a file, it is clear that the file is missing, and the file is missing.