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複製可能アデノウイルス導入骨髄間葉系幹細胞による新しい消化器癌治療法の開発

使用具有复制能力的腺病毒转导的骨髓间充质干细胞开发一种新的胃肠道癌症治疗方法

基本信息

批准号：
15790355
负责人：
佐藤康史
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、骨髄間葉系幹細胞(MSC)を複製可能アデノウイルスのvehiclesとして用いたin vivo腫瘍ターゲッティング療法を開発することを目的とした。各種消化器癌に対してMSCが実際に腫瘍局所へ特異的かっ効率的に集積できるか否かにつき検討した。またtet on systemを組み込んだ複製可能アデノウイスルの作製を試みた。(1)in vivoマウス腫瘍モデルでの基礎的検討-MSCの腫瘍集積性の検討各種消化器腫瘍細胞として、MKN28,MKN45などの胃癌細胞株やhuh7,Hep3Bなどの肝臓癌細胞株を用いた。これらの細胞をnude mouseに対し皮下接種し生着後に1×10^5に調整したMSCを20日間に3回尾静脈投与した群と直接腫瘍内投与する群を設定した。さらにその2週間後に全身の臓器を含め摘出し凍結固定した。これらについて蛍光顕微鏡や坑MSC抗体(A02)を用いて腫瘍内に集積したMSCの割合と分布を検討した。全身の臓器および腫瘍を摘出し検討したところ、いずれも腫瘍特異的なMSCの集積がみられた。とくにHuH7において著明な集積がみられた。(2)tet on systemで制御可能な複製可能アデノウイスルの検討自らの複製に必要なEIAを癌特異的プロモーター(AFP)で制御し、しかもp53を不活化するE1B-55Kを欠失させた構造を有する複製可能アデノウイルスAdAFPep/Repを作製した.本virusを改変しE1Aの発現をtet on systemで制御するためTREとその下流にAFPepの転写因子であるHNF-1遺伝子を組み込んだアデノウイルスを作成しこれらをMSCに感染させたところ、Doxycycline添加により効率よく複製を開始した。これを用いin vivoでの有効性につき検討を行っている。以上のことから、各種消化器腫瘍の移植マウスモデルにおいて、MSCは腫瘍に集積可能でありこれにtet on systemで制御したAdAFPep/Repを搭載するシステムが可能であることが示された。

The purpose of this study is to replicate mesenchymal stem cells (MSCs) that may be used as vehicles to develop in vivo tumor therapy. A variety of digestive organ cancer related to MSC in practice, the collection of specific efficiency of the disease Tet on system: try to copy the system. (1)in The study of tumor aggregation of MSC was used to investigate various digestive tumor cell lines such as MKN28, MKN45, gastric cancer cell lines such as HUH7, Hep3B, etc. The cells were inoculated subcutaneously with 1 × 10^5 cells and the cells were injected directly into the tail vein. After 2 weeks, the whole body was frozen. The distribution of MSC antibody (A02) in the tumor was studied by using light microscope. The whole body of the tumor is extracted from the tumor, and the tumor is collected from the tumor. HuH 7 is the best time to get started. (2) tet on system to control possible replication failure, detection of self replication failure, necessary EIA, cancer-specific protein (AFP) to control failure, inactivation of p53, E1B-55K to control failure of structure, possible replication failure, AdAFPep/Rep. This virus changes the expression of E1A to tet on system control, TRE and AFEP downstream writing factors, HNF-1 gene group to create MSC infection, doxycycline addition, efficiency and replication initiation. This is the first time in a long time that we've had a problem. The above mentioned problems can be solved by transplanting all kinds of digestive organs, and MSC can collect all kinds of digestive organs.