放射線によって誘導されるJNKを利用した感受性予測

使用辐射诱导的 JNK 进行敏感性预测

• 批准号: 15790654
• 负责人: 榎本 敦
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790654/
• 关键词: JNK; Caspase; p52; c-Jun; ストレス応答; アポトーシス; カスパーゼ

私は、希薄なサンプルを泳動し分解能を上げることにより、放射線によって誘導されるJNKタンパク質をWestern解析により見出した。この放射線によって誘導されるJNKタンパク質(分子量50kDa)は、恒常的に発現している既知のJNKタンパク質(46kDa,54kDa)とは異なる分子量を示すこと、JNKリン酸化特異的抗体によって認識されない非リン酸化型フォームであること、JNKタンパク質の全長を認識するポリクローナル抗体では検出されるが、C端を認識するモノクローナル抗体では検出されないことから、これまで報告のない新しいJNKフォームであることが示唆された。またこの誘導型JNKは、放射線誘発細胞死を起こした細胞で見られることから、細胞死の誘導との関連が示唆された。そこで、アポトーシスにおいて実効的な役割を担うシステインプロテアーゼの1つであるカスパーゼの阻害剤を用いて、p52発現誘導における影響を調べた。その結果、caspase-1,-4の阻害剤であるYVAD-CHOでは、X線照射後のp52発現誘導を抑制できなかったが、caspase-3,7の阻害剤であるDEVD-CHOでは、p52の発現とp54の発現量減少が完全に抑制された。さらにin vitroにおいて、リコンビナンドp54JNK1,P54JNK2はactive caspase-3によって切断されることが判明した。以上の結果からX線や温熱によってアポトーシスを起こす細胞にみられるp52JNKの誘導はp54JNKがカスパーゼによって切断された切断産物である。カスパーゼは哺乳類細胞では、14種類以上存在することがわかっている。先の結果からDEVD-CHOに感受性のあるカスパーゼcaspase-3,-7は基質タンパク質内のDXXDという配列を認識し、基質を切断する。しかしながらp54JNKのアミノ酸配列内にDXXD配列は存在しないことがわかったため、C端側に存在するatypicalな配列であるSDTDという配列に着目した。この配列のP1ポディションのDをAに置換した変異体を構築し、活性型caspase-3と反応させたところ、切断は抑制された。さらに切断型JNK(p52)の細胞内局在と機能をかいせきするため、p52発現ベクターを構築し、ヒト胎児腎細胞(293T)に導入した。その結果、P52の細胞内局在は、既知のJNKと変わらないこと、P52発現による放射線感受性の変化は無いことが判明した。In Vitroの実験でもp52のc-Junリン酸化能に変化は認められなかった。

Thin, and in private は な サ ン プ ル を swimming し decomposition can を げ る こ と に よ り, radiation に よ っ て induced さ れ る JNK タ ン パ ク qualitative を Western analytical に よ り shows し た. こ の radiation に よ っ て induced さ れ る JNK タ ン パ ク mass (molecular weight 50 kda) は, constant に 発 now し て い る already know の JNK タ ン パ ク mass (46 kda, 54 kda) と は different な る を molecular weight shown す こ と, JNK リ ン acidification specific antibody に よ っ て know さ れ な い non リ ン acidification model フ ォ ー ム で あ る こ と, JNK タ ン パ ク mass over の を know す る ポ リ ク ロ ー ナ ル antibody で は 検 out さ れ る が, C end を す る モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody で は 検 out さ れ な い こ と か ら, こ れ ま で report の な new し い い JNK フ ォ ー ム で あ る こ と が in stopping さ れ た. ま た こ の induction type JNK は, radiation induced 発 cell death を こ し た cells で see ら れ る こ と か ら, induced cell death の と の masato even が in stopping さ れ た. そ こ で, ア ポ ト ー シ ス に お い て be な service cut sharper を bear う シ ス テ イ ン プ ロ テ ア ー ゼ の 1 つ で あ る カ ス パ ー ゼ の resistance against tonic を い て, p52 発 now induced に お け る influence を adjustable べ た. そ の results, caspase 1-4 の resistance against tonic で あ る YVAD - CHO で は, X-ray irradiation after の p52 発 now induced を inhibit で き な か っ た が, caspase 3, 7 の resistance against tonic で あ る DEVD - CHO で は, p52 の 発 now と p54 の 発 now less が に completely inhibit さ れ た. さ ら に in vitro に お い て, リ コ ン ビ ナ ン ド p54JNK1, P54JNK2 は active caspase 3 に よ っ て cut さ れ る こ と が.at し た. の above results か ら X-ray や warm に よ っ て ア ポ ト ー シ ス を up こ す cells に み ら れ る p52JNK の induced は p54JNK が カ ス パ ー ゼ に よ っ て cut さ れ た cut product で あ る. Youdaoplaceholder0 カスパ ゼ ゼ ゼ mammalian cells で る and more than 14 types of する って とがわ って って って る. First の results か ら DEVD - CHO に susceptibility の あ る カ ス パ ー ゼ caspase 3, 7 は matrix タ ン パ ク mass inside の DXXD と い う match column を know し, matrix を cut-off す る. し か し な が ら p54JNK の ア ミ ノ acid distribution within the column に DXXD match column は exist し な い こ と が わ か っ た た め, C end side に exist す る atypical な match column で あ る SDTD と い う match column に with mesh し た. こ の match column の P1 ポ デ ィ シ ョ ン の D を A に replacement し た - variant を build し type, activated caspase 3 と anti 応 さ せ た と こ ろ, cut off the は suppression さ れ た. さ ら に cut JNK (p52) bureau in と の cell function を か い せ き す る た め, p52 発 now ベ ク タ ー を constructing し, ヒ ト tire where renal cell (293 t) に import し た. そ の results, P52 の bureau in cells, both in は の JNK と - わ ら な い こ と, P52 発 now に よ る radiation susceptibility の variations change は no い こ と が.at し た. In Vitro <s:1> experiment で <s:1> p52 c-Junリ <s:1> acidification energy に change められな められな った った.

项目成果

A.Enomoto et al.: "Decreased c-Myc expression and its involvement in X-ray-induced apoptotic cell death of human T-cell leukemia cell line MOLT-4"International Journal of Radiation Biology. 79. 589-600 (2003)

A.Enomoto 等人：“c-Myc 表达降低及其参与 X 射线诱导的人 T 细胞白血病细胞系 MOLT-4 的细胞凋亡”国际放射生物学杂志。

A.Enomoto et al.: "Caspase-mediated cleavage of JNK during stress-induced apoptosis."BiochemicalBiophysical Research. Commnications. 306. 837-842 (2003)

A.Enomoto 等人：“应激诱导的细胞凋亡期间 Caspase 介导的 JNK 裂解。”生物化学生物物理研究。

Decreased c-Myc expression and its involvement in X-ray-induced apoptotic cell death of human T-cell leukemia cell line MOLT-4

c-Myc 表达降低及其与 X 射线诱导的人 T 细胞白血病细胞系 MOLT-4 凋亡细胞死亡的关系

• 发表时间: 2003
• 期刊: International Journal of Radiation Biology 79
• 作者: A.Enomoto et al.;A.Enomoto et al.
• 通讯作者: A.Enomoto et al.

Caspase-mediated cleavage of JNK during stress-induced apoptosis

• DOI: 10.1016/s0006-291x(03)01050-7
• 发表时间: 2003-07-11
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Enomoto, A;Suzuki, N;Hosoi, Y
• 通讯作者: Hosoi, Y

M.Tomita, N.Suzuki, M.Matsumoto, A.Enomoto et al.: "Wortmannin-enhanced X-ray-induced apoptosis of human T-cell leukemia MOLT-4 cells possibly through the JNK/SAPK pathway"Radiation Research. 160. 467-477 (2003)

M.Tomita、N.Suzuki、M.Matsumoto、A.Enomoto 等人：“渥曼青霉素增强 X 射线可能通过 JNK/SAPK 途径诱导人 T 细胞白血病 MOLT-4 细胞凋亡”辐射研究。