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カルシウムによる転写調節-DREAMの作用-

钙的转录调节 - DREAM 的影响 -

基本信息

批准号：
15791063
负责人：
松田美穂
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15791063/
关键词：
カルシウム転写因子 DREAM 遺伝子発現調節

项目摘要

ヒト甲状腺髄様癌由来細胞株(TT)において、アンチセンスDREAMの導入によりCa^<2+>濃度上昇によってカルシトニン(CT)の発現と分泌が増加したなど、平成15年度の成果より、DREAMのCT分泌調節への関与は確実であると考えられ、さらにその発現調節にも働いている可能性が示唆されたので、平成16年度は主に転写因子DREAMを介するCT遺伝子発現制御機構の解析を行った。CT遺伝子の転写開始点付近から上流の様々な長さの領域を、レポーター(ルシフェラーゼ)遺伝子の上流に組み込んだコンストラクトを作り、DREAMを発現しているTT細胞や、DREAMを発現していないHeLa、HEK293等の培養細胞に形質導入してルシフェラーゼアッセイを行い、Ca^<2+>濃度依存的な転写活性化に必須の領域を検討した。その結果、DRE様配列を含む上流450bp付近の領域が、その特異的な発現調節に関わっていることが分かった。TT細胞では、Ca^<2+>濃度上昇によりプロモータ活性が上昇したが、DREAMを発現していないHeLa細胞では、その変化が見られなかった。そこで、ゲルシフトアッセイを行ったところ、上流450bp付近のDRE様配列にDREAMが結合することが確認された。その他、DRE様配列を含むイントロン1,5についてもコンストラクトを作製し転写活性を検討したが、特に顕著な変化を与える領域は存在しなかった。また、遺伝子導入した細胞にprotein kinase A(PKA)を活性化するforskolin刺激を与えると、Ca^<2+>濃度変化による転写活性の上昇を上回る活性化が見られたので、PKAを介した情報伝達経路の下流に位置するCREBやCREMを介した転写制御もまたCT遺伝子の発現調節に関与していると考えられ、Ca^<2+>を介したシグナリングとのバランスでその遺伝子発現が調節されている可能性が示唆された。

ヒトThyroid cancer-derived cell line (TT) において, アンチセンスDREAMのIntroduction によりCa^<2+> Concentration rise and secretion of CT (CT), increase in secretion, result of 2015, DRE AMのCT secretion regulation is related to the possibility of regulating the secretion of AM and the possibility of regulating the secretion of AM.されたので、Heisei 16 year は主に転WRits factor DREAM を Introduction するCT 缝子発existing control organization のanalytic を行った. CT 伝子の転Start to pay close to から上上の様々な长さの区を、レポーター(ルシフェラーゼ)缝子の上流に组み込んだコンストラクトを作り、DREAMを発appearsしているTTcellや, DREAM's morphological introduction of cultured cells such as HeLa and HEK293ェラーゼアッセイを行い、Ca^<2+>concentration-dependent な転activation is a must-do area and the を検した.その results, DRE 様 arrangement を contains む upstream 450bp pay close to の field が, その specific な発appears to adjust the に关わっていることが分かった. The activity of TT cells increased, the concentration of Ca^<2+> increased, and the activity increased. DREAMを発appears and HeLa cells are exposed and the cells are transformed into DREAM.そこで、ゲルシフトアッセイを行ったところ、Upstream 450bp pay close to のDRE様aligned にDREAMがcombine することがconfirmed された.そのTA, DRE様配arrayを汉むイントロン1,5についてもコンストラクトをThe active writing is made and the special writing is made and the field is existing.また, 缝子 introduced into したcells にprotein kinase A(PKA) activation, forskolin stimulation, Ca^<2+> concentration change, stimulation Write the active rise of the last episode, the activation of the active see, the PKA introduction of the information 伝达経路 the downstream location of the CRE BやCREMを Introduction した転写燷緂またCT 伝子の発在现秒速出账与していると考えられ、Ca^< 2+>を开したシグナリングとのバランスでその缝子発appearsがregulatesされているpossibilityがshows唆された.