权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

体細胞ゲノム再プログラム化の分子機構の解明

阐明体细胞基因组重编程的分子机制

基本信息

批准号：
04J01258
负责人：
黒田貴雄
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J01258/
关键词：
ES Nanog リン酸化細胞周期 Oct4 Promoter Sox2

项目摘要

再プログラム化因子の候補としてクローニングしてきたNanog遺伝子はホメオドメインを有する転写因子であり、胚性幹(ES)細胞の未分化性維持に必須の役割を果たすことが報告されている。Nanog遺伝子の未分化細胞特異的発現を制御する分子機構を解析した結果、これまでに、転写開始点上流にあるOctamer/Sox配列に結合するOct4とSox2によって発現が制御されていることを明らかにした。次に、Nanog蛋白質自身の機能調節機構を解明することを目的に、翻訳後修飾に注目し解析を行った。ウエスタンブロット解析の結果、大腸菌で発現させたNanog蛋白質の分子量が、ES細胞で発現している内在性Nanogの分子量や、NIH3T3細胞で強制的に発現させた外来性Nanogの分子量と異なっていたことから、Nanogは哺乳動物細胞内で翻訳後修飾を受けている可能性が示唆された。そこで、Nanogのフォスファターゼ処理を試みたところ、NanogはES細胞内で高度にリン酸化を受けている事を明らかにした。リン酸化と細胞周期との関連を調べた結果、NanogはM期にCyclin-dependent kinase(CDK)によってリン酸化を受けていることを見い出した。さらに、リン酸化セリン残基の同定を試みたところ、N末端側に集積している9つのセリン残基のうち、4つのセリン残基(S52,S65,S71,S78)がリン酸化を受けていることを明らかにした。

A candidate for a transcription factor is a candidate for a transcription factor that is necessary for embryonic stem (ES) cells to maintain undifferentiation. Molecular mechanism analysis for the control of undifferentiated cell-specific expression of Nanog gene results in Octamer/Sox binding upstream of the start point of writing. Oct4 and Sox2 are involved in the control of expression. The functional regulation mechanism of Nanog protein itself is analyzed. The results of the analysis of Nanog protein in E. coli, the molecular weight of endogenous nanog protein in ES cells, the molecular weight of exogenous Nanog protein in NIH 3T3 cells, and the possibility of modification of Nanog protein in mammalian cells are shown. The first step is to improve the quality of the product. Cyclin-dependent kinase(CDK) is the key factor in the regulation of cell cycle. In addition, the identity of the amino acid residues in the N-terminal side was tested. The amino acid residues (S52,S65,S71,S78) in the N-terminal side were accumulated in the N-terminal side.