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ウシおよびブタ未成熟卵母細胞の新規凍結保存法と凍結障害卵母細胞の救助法の開発

牛、猪未成熟卵母细胞冷冻保存新方法及冷冻损伤卵母细胞抢救方法的开发

基本信息

批准号：
04J03323
负责人：
阿部靖之
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

ウシおよびブタの卵巣内に数多く存在している卵母細胞を有効利用するために,未成熟卵母細胞の凍結保存法の改良,および凍結障害を受けた卵母細胞の救助法の開発を行った。凍結法には短時間で簡便に処理できるガラス化法を用いた。ガラス化法では,細胞毒性のある高濃度の凍結保護物質に暴露することが必要で,その毒性や浸透圧の影響を軽減することがその後の生存に重要である。その方法として,低濃度の凍結保護物質から徐々に高濃度のものに暴露する方法を用い,ウシ凍結卵母細胞由来の個体作出に成功した。その成果を原著論文としてまとめ,Biology of Reproductionに掲載されている。また,凍結卵母細胞の発生能と卵細胞質内の活性型ミトコンドリアの関係を解析し,その成果を第106回畜産学会において発表を予定している。ブタのガラス化保存においては,卵細胞質内に多く含まれる脂質粒が主要な凍結障害の要因である。その脂質粒をガラス化前に除去することが,保存後の生存性の向上につながる。しかし,マイクロマニュピレーターを用いて脂質粒を除去する際に卵母細胞が損傷する可能性が高い。そこで,糖を添加した溶液中で卵母細胞を遠心することで脂質粒を卵母細胞から分離し,その除去を簡便にする方法を開発した。その成果を原著論文としてまとめ,Cryobiologyに掲載されている。また,凍結障害を受けた卵母細胞の救助法として,凍結後の卵母細胞の核をマイクロマニュピレーターで取り出し,未凍結の卵母細胞へ注入する卵核胞置換法を行った。また,凍結障害を回避するために,卵核胞置換技術を用い,卵母細胞から取り出した核のみを凍結する方法を開発した。その成果を,第46回哺乳動物卵子学会で発表し学術奨励賞を受賞した。

The improvement of freezing preservation method of immature oocytes and the development of rescue method of oocytes affected by freezing barrier are discussed. Freezing method is a simple method to deal with in a short time. This method is essential for cytotoxicity and for reducing the effects of exposure to freeze protective substances. The method of freezing oocytes from low concentrations of freeze-protecting substances to high concentrations of freeze-protecting substances was successful. The results of the original paper are published in Biology of Reproduction. In addition, the relationship between the development of frozen oocytes and the activity of oocytes in cytoplasm was analyzed, and the results of the 106th chapter of the Animal Husbandry Society were determined. In the process of egg preservation, lipid particles in egg cytoplasm are the main cause of freezing damage. The lipid particles are removed before transformation, and the viability is improved after preservation. The possibility of oocyte damage is high when lipid particles are removed. A simple method for oocyte separation and removal is developed by adding sugar to the solution The results of the original paper are published in Cryobiology. In addition, the rescue method of oocytes damaged by freezing, the nuclear extraction method of frozen oocytes, and the oocyte replacement method of unfrozen oocytes were carried out. In order to avoid the harm of freezing, the technology of egg nucleus replacement is used, and the method of oocyte extraction and freezing is developed. The 46th Mammalian Oocyte Society presented its achievements and received academic awards.