盲導犬の効率的作出を目的としたイヌ生殖細胞の保存法および分化・発育去誘導法の開発

开发保存狗生殖细胞的方法以及诱导分化和发育损失的方法，以有效生产导盲犬。

• 批准号: 09J04901
• 负责人: 阿部 靖之
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J04901/
• 关键词: イヌ; 胚; 未成熟卵子; 凍結保存; 体外成熟

イヌは,伴侶動物のみならず,盲導犬、麻薬犬などの使役犬として,ヒトと深く関係する動物であるが,イヌにおける繁殖生理学・生殖工学は他動物種に比べ立ち遅れている.イヌ繁殖分野の発展は,効率的な優良個体の作出を通し,我が国における慢性的な盲導犬不足を解決する糸口となり得ることから,社会的意義は高い.そこで,イヌにおける生殖工学技術の開発として,第一に各発生ステージの胚を凍結保存し,凍結感受性の差異を解析するとともに,胚移植時に動物へ与えるストレスを軽減し得る非外科的移植法により,凍結・融解後のイヌ胚に由来する産子作出を試みた.各発生ステージにおける凍結・融解胚の生存性は,16細胞期以前のステージでは高かったのに対し,桑実期および胚盤胞期では非常に低いことを示した.また,1～16細胞期の凍結・融解胚を非外科的に移植した結果,合計5頭の正常な産子が得られ,非外科的移植法の有効性を示した.第二に,イヌ胚の凍結保存法を改良するため,イヌ未成熟卵子を用いて,凍結保護剤および支持体を検討し,凍結保護剤としてDAP213液,支持体としてクライオトップが有効であり,クライオチューブに比ベクライオトップは冷却速度が速いことを明らかとした.第三に,イヌ未成熟卵子の体外成熟法を確立することを目的に,卵丘細胞の生存性と卵子の成熟能との関連性を,体外成熟が既に実用レベルにあるウシおよびブタと比較することで解析した.その結果,正常な卵丘細胞の割合および体外成熟率は,いずれもウシおよびブタに比ベイヌで低く,イヌ卵子における低率な体外成熟率は,卵丘細胞の質的低下に起因することが示唆された.さらに,イヌ卵巣内の卵丘細胞についてアポトーシスは観察されなかったことから,卵子採取時の環境が卵丘細胞の質的低下を招いたと推察される.

イ ヌ は, companion animal の み な ら ず, blind guide dogs, hemp 薬 な ど の use dogs と し て, ヒ ト と deep く masato is す る animal で あ る が, イ ヌ に お け る reproductive physiology, reproductive technology は he erected species than べ に ち 遅 れ て い る. イ ヌ breeding eset の 発 exhibition は, sharper rate な superior individual の make を し, I が countries に お け る chronic な blind guide dogs Foot を solve す る si mouth と な り have る こ と か ら, the significance of social は high い. そ こ で, イ ヌ に お け る reproductive engineering technology の open 発 と し て, first born に each 発 ス テ ー ジ を の embryo freezing preservation し, frozen sensitivity の differences を parsing す る と と も に, embryo transplantation へ に animals and え る ス ト レ ス を 軽 し reduction to る non surgical grafting に よ り, frozen After melting, the <s:1> ヌ embryo に is derived from する to give birth to a を test みた. Various 発 lives ス テ ー ジ に お け る freezing, thawing embryo の survivability は, 16 cell period before の ス テ ー ジ で は high か っ た の に し seaborne, mulberry be period お よ び stage blastoderm cell で は very low に い こ と を shown し た. ま た, freezing, thawing phase 1 ~ 16 cell の embryo を non surgical に transplantation し た result, total 5 head の such normal な が must ら れ, non surgical move The efficacy of the planting method を shows that た. The next に イ を の ヌ embryo freezing preservation method improved す る た め, イ を ヌ immature eggs with い て, freeze protection tonic お よ び support body を 検 for し, freeze protection tonic と し て DAP213 liquid, support body と し て ク ラ イ オ ト ッ プ が have sharper で あ り, ク ラ イ オ チ ュ ー ブ に than ベ ク ラ イ オ ト ッ プ は cooling speed が speed い こ と を Ming ら か と し た . Third に イ ヌ method of in vitro maturation of immature eggs の を establish す る こ と に を purpose, eggs can mound cells の の survivability と eggs mature と の masato を even sex, in vitro maturation が に both be with レ ベ ル に あ る ウ シ お よ び ブ タ と compare す る こ と で parsing し た. そ の as a result, the normal high cell の な eggs cut us お よ び は in vitro maturation rate, い ず れ も ウ シ お よ び ブ タ に than ベ イ ヌ で low く イ ヌ eggs に お け る low な は in vitro maturation rate, egg cause high low cell の qualitative に す る こ と が in stopping さ れ た. さ ら に, イ ヌ egg 巣 の eggs high cell に つ い て ア ポ ト ー シ ス は 観 examine さ れ な か っ た こ と か ら, eggs take の environment が eggs high low cell の qualitative を recruit い た と push examine さ れ る.

项目成果

Pronuclear formation of freeze-dried canine spermatozoa microinjected into mouse oocytes

• DOI: 10.1007/s10815-009-9358-y
• 发表时间: 2009-10
• 期刊: Journal of Assisted Reproduction and Genetics
• 影响因子: 3.1
• 作者: Hiroyuki Watanabe;Tomoyoshi Asano;Y. Abe;Y. Fukui;Hiroshi Suzuki

Successful Delivery of Pups from Cryopreserved Canine Embryos

冷冻保存的犬胚胎成功产下幼崽

• 发表时间: 2009
• 作者: Hiroshi Suzuki;et al.
• 通讯作者: et al.

Cryopreservation of Canine Spermatozoa in a Skim Milk/Sugar-Based Extender

脱脂奶/糖补充剂中冷冻保存犬精子

• 发表时间: 2009
• 作者: Tomoyoshi Asano;et al.
• 通讯作者: et al.

イヌ胚のガラス化保存および非外科的移植による産子作出

狗胚胎的玻璃化保存和非手术移植产生后代

• 发表时间: 2009
• 作者: 阿部靖之;他
• 通讯作者: 他

凍結融解イヌ卵巣の異種移植におけるアシアロ化エリスロポエチン投与の卵胞数減少抑制効果について

给予去唾液酸化促红细胞生成素抑制冻融犬卵巢异种移植中卵泡数量减少的效果

• 发表时间: 2009
• 作者: 鈴木宏志;他
• 通讯作者: 他