異種の卵細胞質を利用した初期化誘導法によるラット体細胞クローン個体の作出

使用外源卵细胞质通过重编程诱导法创建大鼠体细胞克隆

• 批准号: 04J03474
• 负责人: 富岡 郁夫
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J03474/
• 关键词: ラット; マウス; 体細胞クローン; アフリカツメガエル; 核移植; 初期化; リプログラム; 脱分化; 異種の卵細胞質; 連続核移植; 細胞骨格

<目的)体細胞クローン技術の成功により卵子がリプログラム能力を持つことが示された。近年、アフリカツメガエル(Xenopus)未受精成熟卵子にも哺乳類の体細胞をリプログラムする能力があることが報告された。そこで本研究はXenopus卵子抽出液で体外培養細胞をリプログラムし、生殖工学技術へ応用すること、およびリプログラム化細胞の能力の検討を目的とした。<方法)Xenopus排卵卵子を遠心分離することで水層を抽出した。(1)GFP遺伝子導入マウス胎仔線維芽細胞を透過処理し、Xenopus卵子抽出液に1時間暴露処理し、継続培養した。処理後6日目の細胞から、Oct-3/4をRT-PCRにより検出した。(2)処理細胞がどのような形質を持ったのか調べる目的で、内中外胚葉特異的遺伝子、生殖腺分化関連遺伝子、ES細胞関連遺伝子および卵子卵胞関連遺伝子の発現.についてRT-PCRにより網羅的に解析した。(3)リプログラム化細胞をドナーとし核移植に供試した。電気融合法により核移植胚を作出し、塩化ストロンチウムにより活性化を誘起し発生を観察した。<結果・考察)(1)Xenopus卵子抽出物処理後6日目の細胞でOct-3/4の発現が認められ、リプログラム化された。(2)リプログラム化細胞の遺伝子発現を解析した結果、生殖腺の分化に関連する遺伝子であるGata4,Lhx9,BMP4およびSf-1の発現が認められた。Oct-3/4の発現やアルカリフォスファターゼ活性も検出されたため、リプログラム化細胞は生殖腺の方向へのリプログラムと推察された。(3)リプログラム化細胞を用いて核移植を行った結果、無処理の細胞区より分割率(86% vs 73%)、胚盤胞期胚形成率(61% vs 29%)ともに有意に高くなった。これまでリプログラム化は分子生物学的手法によってのみ証明されてきたが、本研究は初めてリプログラム化を現象として顕した有益なものである。

Objective: To demonstrate the success of somatic cell culture technology in improving the ability of egg culture. In recent years, the ability of mammalian somatic cells to reproduce unfertilized mature eggs has been reported. This study aims to investigate the ability of Xenopus ovum extract to culture cells in vitro and to develop reproductive engineering techniques. Xenopus ovum telecentric separation (1)GFP gene introduction into embryonic line cells by Xenopus ovum extract 1 time exposure treatment, culture. 6 days after treatment, the cells were detected by RT-PCR. (2)The development of mesoectoderm specific genes, gonad differentiation-related genes, ES cell-related genes and ovum cell-related genes. RT-PCR is the most effective way to detect and analyze the virus. (3)The cell culture was tested for nuclear transplantation. Electric fusion method is used to detect the activation of nuclear transfer embryos. Results: (1) Oct-3/4 was detected 6 days after Xenopus ovum extract treatment. (2)The results of gene expression analysis of reproductive differentiation cells and identification of gene expression related to gonad differentiation include Gata4, Lhx9,BMP4 and SF-1. Oct. 3/4 is the first time that the development of gonads has been investigated. (3)The results of nuclear transplantation with uncultured cells were higher than those of untreated cells (86% vs 73%) and blastoderm embryo formation (61% vs 29%). This study is based on molecular biological methods and is beneficial to the development of molecular biology.

项目成果

近年のラット発生工学の進歩

大鼠发育工程的最新进展

• 发表时间: 2007
• 期刊: 東北畜産学会報 56(3)
• 作者: 富岡郁夫;松本阿佐子;清水隆;佐藤英明
• 通讯作者: 佐藤英明

Pronuclear formation and mitotic assembly during the first division in rat reconstructed embryos produced by somatic nuclear transfer.

体细胞核移植产生的大鼠重建胚胎第一次分裂期间的原核形成和有丝分裂组装。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Journal of Reproduction and Development 56(in press)
• 作者: Ikuo Tomioka;Eiji Mizutani;Tomoyuki Yoshida;Atsushi Sugawara;Kentaro Inai;Hiroshi Sasada;Eimei Sato.
• 通讯作者: Eimei Sato.

Development of rat tetraploid and chimeric embryos aggregated with diploid cells

大鼠四倍体和与二倍体细胞聚集的嵌合胚胎的发育

• 发表时间: 2006
• 期刊: Zygote 14
• 作者: 松本造道;Yokoo M;松本浩道;松本浩道;松本浩道
• 通讯作者: 松本浩道