グルタミン酸作動性付与因子・小胞型グルタミン酸輸送体の構造と機能に関する研究

谷氨酸赋予因子和囊泡谷氨酸转运蛋白的结构和功能研究

• 批准号: 04J04951
• 负责人: 森本 理代
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J04951/
• 关键词: グルタミン酸; VGLUT; シグナル伝達; トランスポーター; トポロジー; 破骨細胞; VGLU; 共役イオン

トポロジー解析:小胞型グルタミン酸トランスポーターのアミノ末端、カルボキシル末端及びループ領域に対する部位特異抗体を作成し、これを用いて膜内トポロジーを決定した。局在化機構解析:VGLUT2は発現する組織により細胞内局在が異なる。オルガネラへのターゲッティングの違いの原因として、VGLUT2のカルボキシル末端のリン酸化状態の違いを考えた。カルボキシル末端のリン酸化される可能性があるセリン及びチロシン残基のアラニン変異体をCOS7細胞に発現させたところ、Wild typeと同様の局在を示した。カルボキシル末端のリン酸化はターゲティングに重要ではないことがわかった。モチーフ検索により、中央のループ領域にDe-leucineモチーフ(D/EXXXLL)が含まれていることを見出した。De-leucineモチーフはアダプタータンパク質複合体のAP-3が結合し、タンパク質をリソソームに選択的に輸送する。今後、ジロイシンモチーフの欠失変異体および置換体のVGLUT2を発現させ、targetingへの影響を調べていきたい。骨組織におけるグルタミン酸シグナリングと生理的意義:骨組織にはグルタミン酸シグナリングを構成するさまざまなタンパク質が発現している。骨組織でのVGLUTの発現を調べた。破骨細胞にVGLUT1が発現し、しかもトランスサイトーシス小胞に局在していることを見出した。トランスサイトーシス小胞に濃縮されたグルタミン酸は骨基質分解産物とともに分泌された。RT-PCR法と免疫染色により破骨細胞にmGluR8が発現していることを見出した。分泌されたグルタミン酸はオートクリン的にmGluR8を介してトランスサイトーシスを抑制した。VGLUT1ノックアウトマウスでは骨量が減少していた。グルタミン酸シグナリングは骨吸収の抑制因子である。in vivoでグルタミン酸シグナリングの生理的意義が示された最初の例である。

ト ポ ロ ジ ー analytic: small cell type グ ル タ ミ ン acid ト ラ ン ス ポ ー タ ー の ア ミ ノ end, カ ル ボ キ シ ル end and び ル ー プ field に す seaborne る site specific antibodies を し, consummate こ れ を with い て membrane ト ポ ロ ジ ー を decided し た. Localization mechanism analysis :VGLUT2 is present in する tissue によ <s:1> cells with localization in が なる. オ ル ガ ネ ラ へ の タ ー ゲ ッ テ ィ ン グ の violations い の reason と し て, VGLUT2 の カ ル ボ キ シ ル end の リ ン acidification condition の violations い を exam え た. カ ル ボ キ シ ル end の リ ン acidification さ れ る possibility が あ る セ リ ン and び チ ロ シ ン residues の ア ラ ニ ン - variant を COS7 cell に 発 now さ せ た と こ ろ, Wild type と with others の bureau at を し た. カ ル ボ キ シ ル end の リ ン acidification は タ ー ゲ テ ィ ン グ に important で は な い こ と が わ か っ た. モ チ ー フ 検 cable に よ り, central の ル ー プ field に De - leucine モ チ ー フ (D/EXXXLL) contains が ま れ て い る こ と を shows し た. De - leucine モ チ ー フ は ア ダ プ タ ー タ ン パ ク qualitative complex の AP - 3 が し, タ ン パ ク qualitative を リ ソ ソ ー ム に sentaku に conveying す る. In the future, ジ ロ イ シ ン モ チ ー フ の owe lost - variant お よ び replacement body の VGLUT2 を 発 now さ せ, targeting へ の influence を adjustable べ て い き た い. Bone tissue に お け る グ ル タ ミ ン acid シ グ ナ リ ン グ と physiological meaning: bone tissue に は グ ル タ ミ ン acid シ グ ナ リ ン グ を constitute す る さ ま ざ ま な タ ン パ ク qualitative が 発 now し て い る. Bone tissue で <s:1> VGLUT shows を modulation べた. Osteoclast に VGLUT1 が 発 し, し か も ト ラ ン ス サ イ ト ー シ ス vesicular に bureau in し て い る こ と を shows し た. ト ラ ン ス サ イ ト ー シ ス vesicular に enrichment さ れ た グ ル タ ミ ン acid は bone matrix decomposition product と と も に secretion さ れ た. RT-PCR と immunostaining によ osteoclasts にmGluR8が showed <s:1> て る る る とを とを た た た た た. Acid secretion さ れ た グ ル タ ミ ン は オ ー ト ク リ ン of に mGluR8 を interface し て ト ラ ン ス サ イ ト ー シ ス を inhibit し た. VGLUT1ノッ アウト ウスで ウスで が reduction of bone mass が て て た た. Youdaoplaceholder0 グ タ タ タ タ タ acid シグナリ グ グ タ bone resorption inhibitor である. in vivoでグ タ タ タ シグナリ <s:1> acid シグナリ グ <s:1> physiological significance が shows された initial example である.

项目成果

Metabotropic glutamate receptor type 4 is involved in autoinhibitory cascade for glucagon secretion by alpha-cells of islet of Langerhans.

4 型代谢型谷氨酸受体参与朗格汉斯岛 α 细胞分泌胰高血糖素的自抑制级联反应。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Diabetes 53
• 作者: Uehara;S.;Muroyama;A.;Echigo;N.;Morimoto;R;Otsuka;M.;Yatsushiro;S.;Moriyama;Y.
• 通讯作者: Y.

Vesicular storage and secretion of L-glutamate from glucagon-like peptide 1-secreting clonal intestinal L cells

• DOI: 10.1111/j.1471-4159.2005.03575.x
• 发表时间: 2006-01-01
• 期刊: JOURNAL OF NEUROCHEMISTRY
• 影响因子: 4.7
• 作者: Uehara, S;Jung, SK;Moriyama, Y
• 通讯作者: Moriyama, Y