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レーザーを用いたin vivo高度選択的遺伝子導入技術の開発

利用激光开发体内高选择性基因转移技术

基本信息

批准号：
04J07596
负责人：
小倉誠
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

施行条件のさらなる最適化のために、導入遺伝子の量、プロモータの種類、化学的方法との併用等について検討を行なった。実験ではルシフェラーゼ遺伝子をヘアレスラットの皮内にシリンジにて導入した。その結果、導入遺伝子を0.1〜10μgに増加させるに従い、遺CMVプロモータによる遺伝子発現レベルを比較したところ、統計的有意差は見られなかった。またPEIを併用したところ、遺伝子の発現は認められなかった。他の物理的遺伝子導入法と本方法を比較するために、University of California at Santa BarbaraのMitragotri氏のもとで超音波による遺伝子導入実験を行った。実験では周波数20kHzの超音波トランスデューサを用いた。はじめに超音波照射による導入遺伝子の損傷度を調べるために、電気泳動にて超音波適用後のバンドを観察した。その結果、強度が16W/cm^2を超えると、バンドが観察されなくなることがわかった。照射中にバブルが肉眼で観察されたことから、キャビテーションによる導入遺伝子の破壊が示唆された。そこで動物実験では強度0.1〜1.5W/cm^2の超音波を適用した。しかし、ルシフェラーゼ遺伝子をヘアレスラットに導入したところ、いずれの強度においても遺伝子発現レベルはコントロール群と比較して統計的有意差は見られなかった。一般に、生体内では濃度および粘性が比較的高いため、水中に比べキャビテーション閾値が増加すると考えられている。本実験では、ラットの皮内において細胞膜の透過性を亢進させるほどに十分なキャビテーションが得られなかったため、導入遺伝子の発現が見られなかったと推測される。以上の実験条件においてこれらを比較する限り、超音波に比べて本方法が優れていると考えられた。

The optimization of conditions, the amount of introduced molecules, the types of molecules, and the combination of chemical methods are discussed. In order to improve the quality of the products, we should pay attention to the quality of the products. The results showed that the introduction of 0.1~10 μ g of DNA increased significantly, and the detection of DNA increased significantly. Therefore, the combination of PEI and PEI has made the discovery of heritage possible. Comparison of other physical gene transfer methods with this method is made between the University of California at Santa Barbara and Mitragotri's ultrasonic gene transfer method. The frequency of the ultrasonic wave is 20 kHz. The ultrasonic irradiation can be used to adjust the damage degree of the induced particles. The result is that the intensity is 16 W/cm^2. In the middle of the irradiation, the naked eye can detect the presence of the introduced gene. Ultrasonic waves with an intensity of 0.1~1.5W/cm^2 are applicable to animals. In addition, the intensity of the transmission of the In general, the concentration and viscosity in organisms are higher than those in water. The permeability of cell membrane in the skin of the rat is increased, and it is speculated that the expression of the introduced gene is increased. Compared with the ultrasonic method, the ultrasonic method is superior to the ultrasonic method.