AIDcre knock-inマウス作製によるメモリ-B細胞の研究

通过创建 AIDcre 敲入小鼠进行记忆 B 细胞研究

• 批准号: 04J07599
• 负责人: 土井 知光
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J07599/
• 关键词: メモリーB細胞; AID; PI3K

メモリーB細胞を標識するために、AID cre knock-inマウスを作製した。このマウスはAIDプロモーターの支配下でEGFPとcre組み換え酵素の融合タンパク質EGFPcreが発現するマウスである。このマウスにおいてAIDの発現が予想される胚中心B細胞においてEGFPcreの蛍光が観察されるか検討した結果、残念ながらEGFPcreは発現量が低いため検出されなかった。そこでEGFPcreの蛍光は検出感度以下と考え、レポーターマウスとしてcre発現によりGFPを発現するACTB-β-geo/GFPマウスを用いることにした。このマウスとかけ合わせ、cre発現細胞の検討を行った。その結果、GFP発現細胞は頻度は低いが、常に胚中心が存在するパイエル板のB細胞に限局して検出された。また非免疫マウス脾臓ではGFPの発現は検出されなかったが、羊赤血球で免疫した後には胚中心の出現に伴ってGFP陽性細胞が検出された。これらの事からGFP陽性細胞はAIDの発現と相関していることが示唆された。そこで、このマウスを用いAIDを発現した経歴を持つB細胞の生体内局在を調べた。その結果、パイエル板と共に胚中心を多く含む顎下リンパ節でGFP陽性細胞が多かった。また、胸腺内のB細胞で高いGFP陽性率であった。一方、メモリーB細胞がホーミングすると考えられる骨髄ではGFP陽性率は低かった。これまでGFPの陽性率と胚中心の存在率は相関していたため、胸腺B細胞が胚中心を形成しているか調べたが、形成は見られなかった。また、胸腺B細胞が発現している抗原受容体はクラススイッチしたものが多く、GFP陽性率と相関した。今後、これらのB細胞のAIDの発現を調べ、胸腺B細胞がメモリーB細胞であるか検討する。

B cell identification, AID cre knock-in and control EGFPcre is a fusion enzyme under the control of AID. The expression of EGFPcre in embryonic B cells was lower than that in normal B cells. The EGFPcre's light sensitivity is lower than that of ACTB-β-geo/GFP. Cre is the first cell to be discovered. As a result, GFP was found at low frequencies, often in embryonic centers, and in B cells at low frequencies. The expression of GFP was detected in non-immune cells, and the expression of GFP positive cells was detected in the embryo center after immunization of sheep red blood cells. This incident also shows that GFP-positive cells are related to the discovery and development of AID. The B-cell gene is a gene that can be used to regulate the growth of B-cells. As a result, there were many GFP positive cells in the embryo center. The positive rate of GFP in B cells in thymus was high. The positive rate of GFP in B cells was low. The percentage of GFP positive cells and the percentage of embryo centers were correlated. The percentage of thymic B cells and embryo centers was correlated. The expression of B cells in thymus was correlated with the number of GFP positive cells. In the future, the development of B cells and B cells in thymus will be regulated.