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消化管上皮幹細胞における古典的WNTシグナル伝達経路の多様性に関する研究

胃肠道上皮干细胞经典WNT信号通路多样性研究

基本信息

批准号：
21K07972
负责人：
土井知光
金额：
$ 2.66万
依托单位：
University of Occupational and Environmental Health, Japan
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

古典的WNTシグナル伝達経路は、β-cateninを介して転写制御を行うことで、消化管幹細胞の維持、分化において中心的役割をしている。しかし、幹細胞から分化する過程でWNTシグナルの標的遺伝子が切り替わる仕組みは明らかになっていない。申請者はこれまでに、β-cateninと結合するコアクチベーターがCBPからp300にスイッチすることで、標的遺伝子が切り替わることを示した。そこで本研究ではさらに発展させ、（１）上皮幹細胞及び分化過程における、β-cateninコアクチベーターの切り替えの解析、（２）β-cateninコアクチベーター切り替えを誘導するタンパク質間相互作用阻害剤のスクリーニングと、その標的分子同定、そして（３）阻害剤の組織修復、癌幹細胞増殖への作用を明らかにすることで、消化管上皮幹細胞及び分化過程における異なるβ-catenin複合体の役割を明らかにする。初年度、申請者はβ-cateninとコアクチベーターp300の複合体が核内に観察される細胞集積が、小腸上皮陰窩底部に認められることを明らかにした。昨年度は、化合物スクリーニングの指標細胞の選定を行った。当初、β-cateninとp300及びCBPのゲノム上での結合領域の解析に用いた膵癌細胞株PANC-1を用いる予定であったが、β-cateninの誘導剤CHIR-99021やβ-cateninとCBPの結合阻害剤ICG-001を作用させた時の、分化状態に変化が無く、幹細胞能と分化応答の切り替えを制御する化合物のスクリーニングには適さないことがわかった。そこで、他の細胞株を検討した結果、腎癌細胞株Caki-1がCHIR-99021に応答して、近位尿細管分化マーカーであるL T Lレクチンの染色性を示すことを見出した。そこで本年度は、Caki-1細胞を用いて、化合物のスクリーニングを実施する。

The classical WNT pathway, β-catenin pathway and regulation pathway, maintenance and differentiation of digestive tract stem cells Stem cell differentiation is a process of WNT and target gene replacement. The applicant shall submit the following documents: β-catenin, CBP, p300, target gene, etc. This study is aimed at the development of (1) epithelial stem cells and differentiation process, analysis of β-catenin cleavage,(2) induction of β-catenin cleavage, molecular identity of inhibitors of plasma-to-matrix interaction,(3) tissue repair of inhibitors, role of cancer stem cell proliferation, Epithelial stem cells in digestive tract and differentiation process are different. The function of β-catenin complex is different. In the first year, the applicant turned to β-catenin and p300 complex, and observed the accumulation of cells in the nucleus and the bottom of the small intestine epithelium. In the past year, the selection of indicator cells for chemical compounds was carried out. The binding domain of β-catenin p300 and β-catenin CBP was analyzed in the cancer cell line PANC-1. The binding domain of β-catenin p300 and β-catenin CBP was analyzed in the tumor cell line PANC-1. The binding domain of β-catenin p300 and β-catenin CBP was analyzed in the tumor cell line PANC-1. The binding domain of β-catenin p300 and β-catenin CBP was analyzed in the tumor cell line PANC-1. The binding domain of β-catenin p300 and β-catenin CBP was analyzed in the tumor cell line PANC-1. The results of the study of other cell lines, renal cell carcinoma cell line Caki-1 and CHIR-99021, showed that there was no significant difference in the differentiation of proximal urinary tubules. This year, Caki-1 cells will be used and compound cloning will be implemented.