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新規な蛍光標識法を用いた甲殻類神経ペプチド類の機能、動態および受容体解析

使用新型荧光标记方法对甲壳动物神经肽进行功能、动力学和受体分析

基本信息

批准号：
04J07880
负责人：
片山秀和
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

カニの一種であるBlue crabの脱皮抑制ホルモン(MIH)の組換え体を、大腸菌を宿主とした発現系を利用して調製した。この組換えペプチドを用いてセカンドメッセンジャーアッセイを行ったところ、Y器官におけるcGMP濃度の顕著な上昇が確認された。ここで得られた組換え体によってMIHのさらに詳細な機能の解析が進むものと期待される。甲殻類血糖上昇ホルモン(CHH)は、甲殻類の血糖値を制御するホルモンとしてよく研究されている。そのスプライシングバリアントとしてPO-CHHというペプチドが報告されているが、このペプチドの機能は明らかになっていない。そこで、このペプチドの機能を探索することを目的として、組換えPO-CHHを調製した。この組換えPO-CHHを用いてセカンドメッセンジャーアッセイを行った結果、えら、肝膵臓、触角、Y器官、筋肉ではcGMP値の上昇は見られなかったが、前腸(胃)、中腸、後腸、心臓において有意な上昇が観察された。組換えPO-CHHを放射性同位元素によって標識し、その標識ペプチドを用いて中腸および後腸の膜画分との結合実験を行った。その結果、PO-CHHは両組織の膜と特異的に結合することが明らかになった。これはPO-CHH受容体がこれらの組織の細胞膜上に存在していることを示している。これらの結果から、PO-CHHが腸管を介して何らかの機能をはたしていることが明らかになった。CHHはえらや肝膵臓、筋肉などを介して機能することから、PO-CHHの受容体はCHHとは異なっていることが示唆された。CHHの機能が血中グルコース濃度の調整、血中浸透圧調整などであることから、PO-CHHの機能が腸管におけるグルコース(あるいはそれ以外の栄養素)の取り込み、あるいはイオン透過などの調節を行っていることが予想される。これらの仮説について今後、検証が進んでいくと期待される。

カニのOne kind of Blue crabのpeeling-inhibiting ホルモン(MIH)のbody replacement, coliform をhost とした発existing system をutilization してmodulation した. The この group changes the えペプチドを Use the いてセカンドメッセンジャーアッセイを行ったところ、Y organ におけるcGMP concentration の顕在な Increase がconfirmation された.ここで got the られた combination えbody によってMIH のさらにな function の ANALYSIS がむものとされる. Crustacean Blood Sugar Increase (CHH), Crustacean Blood Sugar Control Study (CHH) Research on Blood Sugar Level of Crustacean.そのスプライシングバリアントとしてPO-CHHというペプチドがreportされているが、このペプチドの function は明らかになっていない.そこで、このペプチドのfunctionをExplorationすることをPurposeとして、Group replacementえPO-CHHをmodulationした.この集团えPO-CHHを Use いてセカンドメッセンジャーアッセイを行った results, えら, liver gallbladder, antennae, Y organ, Muscle ではcGMP 値のrise は见られなかったが, foregut (stomach), midgut, hindgut, heart 臓において有purpose なrise が観看された. Replace the radioactive isotopic element PO-CHH with the によって mark and the その mark ペプチドを with the いて midgut および hindgut のmembrane drawing points and との combined with 実験を行った. As a result, PO-CHH is the tissue membrane and the specific binding is the result. The PO-CHH receptor is present on the cell membrane of the tissue.これらのRESULTS から、PO-CHHがINTESTINAL をして何らかのFUNCTION をはたしていることが明らかになった. P O-CHH's receptor is different from CHH's. CHH's function is to adjust the blood concentration, blood infiltration pressure is to be adjusted, and PO-CHH's function is to adjust the intestinal tube.グルコース(あるいはそれの栄nutrient)のtakeり込み、あるいはイオン adjusts the を行っていることが through the などのされる.これらの仮说についてFrom now on, 検证が进んでいくとLooking forward to される.