X11Lファミリータンパク質による細胞内輸送機構の解析

X11L家族蛋白的细胞内转运机制分析

• 批准号: 04J11179
• 负责人: 住岡 暁夫
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J11179/
• 关键词: アルツハイマー病; 転写; βアミロイド; 核移行; キナーゼ

アルツハイマー病(AD)は、最も患者数の多い老人性痴呆症であるが、その発症メカニズムは未解明な点が多い。βアミロイド(Aβ)はADの発症に関わる分子と考えられているが、Aβの前駆体蛋白質として同定された分子であるAPPの機能もまた、未解明な点が多い。近年の知見では、APPの機能として、代謝過程で細胞内に放出される細胞質ドメイン(AICD)が、核内で転写を制御するのではないかと報告されている。AICD、APPの機能を明らかにすることは、AD発症メカニズムを理解する上で重要な知見となりうる。X11 familyは、Phopho-Tyrosine Interaction (PI)ドメインと二つのPDZドメインを有するアダプター分子で、ヒトではX11、X11L、X11L2で構成される。これまでに、X11 familyは生体内でAPPの細胞質ドメインと結合し複合体を形成し、また細胞を使った実験でAPPの代謝、Aβ産生を制御することが明らかになっている。X11 familyは従来細胞質蛋白であると考えられ、核内での機能は全く解析されなかったが、我々はAICD結合分子の核移行性を網羅的に検証し、その結果、X11 familyの機能として核・細胞質間のシャトリング機能を明らかにした。昨年度、私はX11 familyの一つX11L2に注目し解析を行った。その結果、生化学的分画によりX11L2が生体内では核に局在すること、分子・細胞生物学的手法により核移行・核排出を担うX11L2中の配列を明らかにした。またGal4 DNA結合ドメインをX11L2に融合させたcDNAコンストラクトを用いた実験から、X11L2が転写活性化能を有することも明らかにした。さらにkinaseへの反応性の検討から、この転写活性がMAP kinaseの制御を受けることを明らかにし、X11L2に結合する転写因子を同定することに成功した。そこで今年度は、X11L2の転写調節の機能に注目し解析を進めた。内在性X11L2をRNAiでノックダウンした細胞を作製し、転写制御を受ける遺伝子の同定に成功した。さらに、Gal4 DNA結合ドメインを融合させたAICDとX11L2複合体が転写活性を示すことを明らかにし、X11L2によって転写制御を受ける遺伝子の一部はAICDによっても転写制御を受けることを明らかにした。また、X11L2でおこなった解析を元に、X11Lについても核内機能の解析を進めた。X11L2では転写因子がN末端側領域に結合していたことから、X11Lのこの領域に相当する配列をbaitに結合分子をyeast twohybrid screeningによって探索を行った。その結果、結合分子としてGlucocorticoid Receptorを含む複数の核内受容体の単離に成功した。

Alzheimer's disease (AD) is the most common form of Alzheimer's disease.β-amyloid (Aβ) is A protein involved in the development of AD. In recent years, there have been reports on the function of APP and the regulation of intracellular release and metabolism of APP (AICD). AICD, APP function is clear, AD disease is clear. X11 family is composed of X11, X11L, X11L2, and Phoho-Tyrosine Interaction (PI). The X11 family has a complex of APP cytoplasmic binding in vivo, and the cells regulate APP metabolism and Aβ production. The X11 family has been examined for cytoplasmic proteins, analyzed for nuclear functions, and demonstrated for nuclear migration of AICD binding molecules. The X11 family has been examined for nuclear and cytoplasmic functions. Last year, the X11 family and the X11L2 family were analyzed. The results, biochemical analysis, molecular and cellular biological methods of nuclear migration and nuclear expulsion in X11L2 are clear. Gal4 DNA binding site X11L2 fusion site cDNA library site X11L2 fusion site The study of the reactivity of the kinase, the activity of the kinase, the inhibition of the MAP kinase, and the determination of the binding factor of X11L2 were successful. This year, the X11L2 has a function of writing adjustment. Intrinsic X11L2 RNAi is successful in controlling the cell cycle and in controlling the cell cycle. In addition, the Gal4 DNA binding site is fused to the AICD and X11 L2 complex, which is a part of the AICD and X11L2 complex. X11 L2, X11L2, X11 L3, X11 L4, X11 L5, X11 L6, X11 L7, X11 L8, X11 L9, X19 L X11L2 is a two-hybrid screening site for the N-terminal domain. X11L is a two-hybrid screening site for the N-terminal domain. As a result, binding molecules and Glucocorticoid Receptors were successfully isolated from multiple nuclear receptors.